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美琪琪

新虫 (初入文坛)

[求助] 定量PCR标准曲线所算的浓度与稀释浓度不一样怎么回事啊?跪求大神们帮我解决下?

稀释浓度         CQ值       X值((b-y)/k)  拷贝数
6.7x107        10000000  13.45           6.005880623            1013632.725
6.7x106        1000000          16.91           4.988532784            97394.13045
6.7x105        100000          20.38           3.968244634            9294.898121
6.7x104        10000          23.45           3.06556895           1162.971174
6.7x103        1000          27.49           1.877683034           75.4541332
6.7x102        100              30.22     1.074977948          11.8844188
6.7x101        10              33.4     0.139958836           1.380253432
以上数据;10倍稀释了标准质粒的浓度的,   CQ值是做标曲时的值,  x是根据y=-3.401x+33.876 带入CQ值得到的 ,然后就是算出拷贝数浓度,
但是问题出来了,假如我把CQ值等于27.49(以上CQ值),但是根据标准曲线算出的浓度等于75.5个拷贝数,但是在稀释浓度是10的3次方啊,同理,在CQ值等于33.4时,所算出的拷贝数是1.3个拷贝数,但是我的标曲上是最低拷贝数是67个拷贝数啊,显然不对了,怎么回事啊?   急死了,6月份毕业,在等文章了。跪谢大神帮忙解答了!!!
                    在线等待!!
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jackyoung

新虫 (正式写手)

手机上看表效果不是很好,所以就不说数据本身了。
请考虑稀释倍数的范围,引物括增效率高低影响会很大,通常在一个比较小的范围内才可接受。建议稀释倍数控制一下,比如2倍或4倍梯度稀释,大约5-7个点吧,应该还能接受。

发自小木虫Android客户端
CestLaVie
2楼2016-01-01 23:20:30
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