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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒提取
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龙龙蛋蛋狗

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒提取 已有5人参与

做基因打靶方面的，载体转到大肠杆菌后，由于表达载体拷贝数过低，在提取质粒时提取出来的量也很少，无法做切胶回收片断。
怎么才能提高质粒浓度？我用用的是天根试剂盒，求高人指点
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1楼 2015-12-31 19:58:27
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ssswzf

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
龙龙蛋蛋狗(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:27:40
你好，你用的什么方法提取啊？手工提取还是柱子提取？
最后的洗脱是比较矛盾的，如果要求浓度的话，洗脱液就少，但是效率不高。如果追求总量的话，质粒就稀释了。
与其这样纠结，不如换种方法试试看！
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2楼2016-01-05 16:42:53
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carl_taijun

铜虫 (初入文坛)
菌液大量培养～～在实验中间步骤等择机和并到一起～

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3楼2016-01-07 01:49:33
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heianduck

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

菌液用大管培养，培养时间稍微长一点。
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4楼2016-01-07 08:00:22
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我是淡淡老师

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

手抽的方法会比试剂盒抽的浓度高出十几倍，但手抽的不太干净，杂质会比较多。

要增加浓度的话建议如下：两次上柱，60度水两次洗脱等。

培养时间就在14小时左右，直到培养基浑浊不透明为止。
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5楼2016-01-07 19:07:50
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科学小覃

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我的方法这这样的，50lm菌液，离心后用4-6个体系（小提试剂盒）进行悬浮，裂解，中和，离心等步骤；然后将上清加到两个吸附柱上（可多次上柱）；漂洗正常，最后每个吸附柱用40ul左右的65度水洗脱。
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生物科学
6楼2016-01-07 20:08:41
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边木殇

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我们一般是用的试剂盒提取，大量提可以用maxi prep。 摇菌14-16小时
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7楼2016-01-07 20:21:43
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好好学习啊咧

新虫 (初入文坛)
菌液多点 全加到一个吸附柱上试试

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8楼2016-04-16 18:51:01
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