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龙龙蛋蛋狗

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒提取 已有5人参与

做基因打靶方面的,载体转到大肠杆菌后,由于表达载体拷贝数过低,在提取质粒时提取出来的量也很少,无法做切胶回收片断。
怎么才能提高质粒浓度?我用用的是天根试剂盒,求高人指点
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ssswzf

金虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

★ ★
龙龙蛋蛋狗(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:27:40
你好,你用的什么方法提取啊?手工提取还是柱子提取?
最后的洗脱是比较矛盾的,如果要求浓度的话,洗脱液就少,但是效率不高。如果追求总量的话,质粒就稀释了。
与其这样纠结,不如换种方法试试看!
2楼2016-01-05 16:42:53
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carl_taijun

铜虫 (初入文坛)

菌液大量培养~~在实验中间步骤等择机和并到一起~

发自小木虫IOS客户端
3楼2016-01-07 01:49:33
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heianduck

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

菌液用大管培养,培养时间稍微长一点。
4楼2016-01-07 08:00:22
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我是淡淡老师

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

手抽的方法会比试剂盒抽的浓度高出十几倍,但手抽的不太干净,杂质会比较多。

要增加浓度的话建议如下:两次上柱,60度水两次洗脱等。

培养时间就在14小时左右,直到培养基浑浊不透明为止。
5楼2016-01-07 19:07:50
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科学小覃

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我的方法这这样的,50lm菌液,离心后用4-6个体系(小提试剂盒)进行悬浮,裂解,中和,离心等步骤;然后将上清加到两个吸附柱上(可多次上柱);漂洗正常,最后每个吸附柱用40ul左右的65度水洗脱。
生物科学
6楼2016-01-07 20:08:41
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边木殇

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我们一般是用的试剂盒提取,大量提可以用maxi prep。 摇菌14-16小时
7楼2016-01-07 20:21:43
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好好学习啊咧

新虫 (初入文坛)

菌液多点 全加到一个吸附柱上试试

发自小木虫IOS客户端
8楼2016-04-16 18:51:01
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