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新虫 (初入文坛)

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[求助] 荧光定量pcr绝对定量构建标准质粒已有1人参与

构建荧光定量pcr绝对定量的时候的标准质粒时，连接转化涂平板，经过蓝白斑筛选，挑选白斑扩大培养，用新鲜菌液做模板，M13做引物进行pcr检测，条带符合要求，但三个基因送出去测序后，在NCBI上VecSreen比对得到如下结果，不知道是什么原因，麻烦各位解答一下，谢谢。这是3个不同的基因。

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1楼 2015-12-31 13:37:04

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你是路人甲

铜虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

PCR（Polymerasechain reaction，聚合酶链式反应）是模拟体内DNA复制过程，对特定DNA序列进行大量扩增的一种技术。 PCR反应是以4种dNTP为底物，引物引导，DNA聚合酶催化作用下，在单链DNA模板3’末端开始进行互补链的延伸，多次反复的扩增使特定DNA序列以指数增加。我们实验室用BIOG 染料法荧光定量PCR和BIOG探针法荧光定量PCR测得的扩增曲线起跳值一般在30左右，每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。

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