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Valonia_

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量pcr绝对定量构建标准质粒 已有1人参与

构建荧光定量pcr绝对定量的时候的标准质粒时,连接转化涂平板,经过蓝白斑筛选,挑选白斑扩大培养,用新鲜菌液做模板,M13做引物进行pcr检测,条带符合要求,但三个基因送出去测序后,在NCBI上VecSreen比对得到如下结果,不知道是什么原因,麻烦各位解答一下,谢谢。这是3个不同的基因。

荧光定量pcr绝对定量构建标准质粒
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荧光定量pcr绝对定量构建标准质粒-1
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荧光定量pcr绝对定量构建标准质粒-2
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你是路人甲

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

PCR(Polymerasechain reaction,聚合酶链式反应)是模拟体内DNA复制过程,对特定DNA序列进行大量扩增的一种技术。 PCR反应是以4种dNTP为底物,引物引导,DNA聚合酶催化作用下,在单链DNA模板3’末端开始进行互补链的延伸,多次反复的扩增使特定DNA序列以指数增加。我们实验室用BIOG 染料法荧光定量PCR和BIOG探针法荧光定量PCR测得的扩增曲线起跳值一般在30左右,每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。
2楼2019-12-16 11:06:11
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