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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 正在做文库质粒转化，但是转化效率不高，请高手指教
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yyx1121

金虫 (正式写手)

[交流] 正在做文库质粒转化，但是转化效率不高，请高手指教

利用T4连接酶连接后，文库质粒大小约8.3kb——13kb，转化感受态大肠肝菌DH5a(自制的感受态细胞)进行文库质粒的扩增，但是每次转化（近40次）的只能得到约100个克隆，偶然一次达到了1200多个克隆

我想要让每次转化都最好达到至少1000个克隆以上

那么，我想请教大家如何通过改进方法使文库质粒转化的效率提高？

谢谢大家！
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努力过好每天。
1楼 2008-09-26 14:35:17
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★
yyx1121(金币+2,VIP+0):先谢谢！我用的氯化钙法，体系为200ml，加入了10ul的连接产物。转化效率一直不高，仅有的最高一次就是10的三次方。
我也在做，呵呵，经常交流啊。
你测过你的感受态的转化效率么？能到10的几次幂？
电击转化还是氯化钙转化？
转化的时候用的体系是100 微升么？
加了？％的连接产物进去？
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2008-09-26 20:10:01
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
★
yyx1121(金币+1,VIP+0):先谢谢！我用的氯化钙法，体系为200ml，加入了10ul的连接产物。转化效率一直不高，仅有的最高一次就是10的三次方。
建议你用电击感受态 做好了的话 会有很多的斑
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3楼2008-09-26 20:17:54
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秦廷

银虫 (初入文坛)
★
yyx1121(金币+1,VIP+0):先谢谢！我用的氯化钙法，体系为200ml，加入了10ul的连接产物。转化效率一直不高，仅有的最高一次就是10的三次方。
使用电击转化，一次的连接产物分若干个电击杯来电转，
合起来的转化产物可以达到10的6次方以上的转化克隆。
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4楼2008-09-26 21:56:34
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sumertansy

铜虫 (小有名气)
★
yyx1121(金币+1,VIP+0):先谢谢！我用的氯化钙法，体系为200ml，加入了10ul的连接产物。转化效率一直不高，仅有的最高一次就是10的三次方。
用电转化，可以考虑买商用的电转化细胞，效率会很高。
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5楼2008-09-26 22:15:41
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yyx1121

金虫 (正式写手)
我转化的产物质需要达到10的四次方就可以了

用的是氯化钙法

请问有什么技巧，使用这种方法的转化效率提高呢？
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努力过好每天。
6楼2008-09-27 13:14:22
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
这么大片段得文库建成很不容易，所以试剂、感受态等都要用好的
感受态最好用商品电转化感受态
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漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
7楼2008-09-27 16:27:40
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mark32280667806

制作超级感受态，可以达到10的9此方，好的可以到10次方！！！！
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8楼2008-09-29 01:42:05
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