应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 正在做文库质粒转化，但是转化效率不高，请高手指教
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 860  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 yyx1121 的 35 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yyx1121

金虫 (正式写手)

[交流] 正在做文库质粒转化，但是转化效率不高，请高手指教

利用T4连接酶连接后，文库质粒大小约8.3kb——13kb，转化感受态大肠肝菌DH5a(自制的感受态细胞)进行文库质粒的扩增，但是每次转化（近40次）的只能得到约100个克隆，偶然一次达到了1200多个克隆

我想要让每次转化都最好达到至少1000个克隆以上

那么，我想请教大家如何通过改进方法使文库质粒转化的效率提高？

谢谢大家！
回复此楼

» 猜你喜欢
努力过好每天。
1楼 2008-09-26 14:35:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
这么大片段得文库建成很不容易，所以试剂、感受态等都要用好的
感受态最好用商品电转化感受态
赞一下 回复此楼
漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
7楼2008-09-27 16:27:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★
yyx1121(金币+2,VIP+0):先谢谢！我用的氯化钙法，体系为200ml，加入了10ul的连接产物。转化效率一直不高，仅有的最高一次就是10的三次方。
我也在做，呵呵，经常交流啊。
你测过你的感受态的转化效率么？能到10的几次幂？
电击转化还是氯化钙转化？
转化的时候用的体系是100 微升么？
加了？％的连接产物进去？
赞一下(8人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2008-09-26 20:10:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
★
yyx1121(金币+1,VIP+0):先谢谢！我用的氯化钙法，体系为200ml，加入了10ul的连接产物。转化效率一直不高，仅有的最高一次就是10的三次方。
建议你用电击感受态 做好了的话 会有很多的斑
赞一下(8人) 回复此楼
3楼2008-09-26 20:17:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秦廷

银虫 (初入文坛)
★
yyx1121(金币+1,VIP+0):先谢谢！我用的氯化钙法，体系为200ml，加入了10ul的连接产物。转化效率一直不高，仅有的最高一次就是10的三次方。
使用电击转化，一次的连接产物分若干个电击杯来电转，
合起来的转化产物可以达到10的6次方以上的转化克隆。
赞一下(7人) 回复此楼
4楼2008-09-26 21:56:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085701环境工程，267求调剂 +6 minht 2026-03-26 6/300 2026-03-27 11:18 by 柠七七七
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +3 辰沐5211314 2026-03-26 3/150 2026-03-27 10:24 by 尽舜尧1
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-27 3/150 2026-03-27 10:17 by guoweigw
[考研] 316求调剂 +5 江辞666 2026-03-26 5/250 2026-03-27 08:08 by hypershenger
[考研] 284求调剂 +11 junqihahaha 2026-03-26 12/600 2026-03-27 04:37 by wxiongid
[考研] 287求调剂 +7 land xuxu 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:44 by wxiongid
[考研] 286求调剂 +5 PolarBear11 2026-03-26 5/250 2026-03-26 23:59 by 运气yunqi
[考研] 求调剂 +5 芦lty 2026-03-25 6/300 2026-03-26 20:49 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +6 谷雨上岸 2026-03-23 7/350 2026-03-26 18:55 by 不吃魚的貓
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-26 6/300 2026-03-26 18:03 by 邱gl
[考研] 081700 调剂 267分 +11 迷人的哈哈 2026-03-23 11/550 2026-03-26 15:41 by zzll406
[考研] 309求调剂 +4 gajsj 2026-03-25 5/250 2026-03-26 00:27 by Dyhoer
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:03 by cmz0325
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 食品专硕 一志愿双一流 328 +3 xiaom99 2026-03-21 4/200 2026-03-24 21:20 by lailaisimei
[考研] 361求调剂 +3 Glack 2026-03-22 3/150 2026-03-23 22:03 by fuyu_
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 求调剂一志愿海大，0703化学学硕304分，有大创项目，四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭