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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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yyx1121

金虫 (正式写手)

[交流] 正在做文库质粒转化,但是转化效率不高,请高手指教

利用T4连接酶连接后,文库质粒大小约8.3kb——13kb,转化感受态大肠肝菌DH5a(自制的感受态细胞)进行文库质粒的扩增,但是每次转化(近40次)的只能得到约100个克隆,偶然一次达到了1200多个克隆

我想要让每次转化都最好达到至少1000个克隆以上

那么,我想请教大家如何通过改进方法使文库质粒转化的效率提高?

谢谢大家!
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努力过好每天。
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)

这么大片段得文库建成很不容易,所以试剂、感受态等都要用好的
感受态最好用商品电转化感受态
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
7楼2008-09-27 16:27:40
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

★ ★
yyx1121(金币+2,VIP+0):先谢谢!我用的氯化钙法,体系为200ml,加入了10ul的连接产物。转化效率一直不高,仅有的最高一次就是10的三次方。
我也在做,呵呵,经常交流啊。
你测过你的感受态的转化效率么?能到10的几次幂?
电击转化还是氯化钙转化?
转化的时候用的体系是100 微升么?
加了?%的连接产物进去?
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2008-09-26 20:10:01
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)


yyx1121(金币+1,VIP+0):先谢谢!我用的氯化钙法,体系为200ml,加入了10ul的连接产物。转化效率一直不高,仅有的最高一次就是10的三次方。
建议你用电击感受态 做好了的话 会有很多的斑
3楼2008-09-26 20:17:54
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秦廷

银虫 (初入文坛)


yyx1121(金币+1,VIP+0):先谢谢!我用的氯化钙法,体系为200ml,加入了10ul的连接产物。转化效率一直不高,仅有的最高一次就是10的三次方。
使用电击转化,一次的连接产物分若干个电击杯来电转,
合起来的转化产物可以达到10的6次方以上的转化克隆。
4楼2008-09-26 21:56:34
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