24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 858  |  回复: 8
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 yyx1121 的 35 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yyx1121

金虫 (正式写手)

[交流] 正在做文库质粒转化,但是转化效率不高,请高手指教

利用T4连接酶连接后,文库质粒大小约8.3kb——13kb,转化感受态大肠肝菌DH5a(自制的感受态细胞)进行文库质粒的扩增,但是每次转化(近40次)的只能得到约100个克隆,偶然一次达到了1200多个克隆

我想要让每次转化都最好达到至少1000个克隆以上

那么,我想请教大家如何通过改进方法使文库质粒转化的效率提高?

谢谢大家!
回复此楼

» 猜你喜欢

努力过好每天。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mark32280667806

制作超级感受态,可以达到10的9此方,好的可以到10次方!!!!
8楼2008-09-29 01:42:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

★ ★
yyx1121(金币+2,VIP+0):先谢谢!我用的氯化钙法,体系为200ml,加入了10ul的连接产物。转化效率一直不高,仅有的最高一次就是10的三次方。
我也在做,呵呵,经常交流啊。
你测过你的感受态的转化效率么?能到10的几次幂?
电击转化还是氯化钙转化?
转化的时候用的体系是100 微升么?
加了?%的连接产物进去?
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2008-09-26 20:10:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snzydong

铁杆木虫 (著名写手)


yyx1121(金币+1,VIP+0):先谢谢!我用的氯化钙法,体系为200ml,加入了10ul的连接产物。转化效率一直不高,仅有的最高一次就是10的三次方。
建议你用电击感受态 做好了的话 会有很多的斑
3楼2008-09-26 20:17:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秦廷

银虫 (初入文坛)


yyx1121(金币+1,VIP+0):先谢谢!我用的氯化钙法,体系为200ml,加入了10ul的连接产物。转化效率一直不高,仅有的最高一次就是10的三次方。
使用电击转化,一次的连接产物分若干个电击杯来电转,
合起来的转化产物可以达到10的6次方以上的转化克隆。
4楼2008-09-26 21:56:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +3 张zz111 2026-03-27 4/200 2026-03-27 11:07 by 帕尔马拉特
[考研] 材料学硕,求调剂 6+5 糖葫芦888ll 2026-03-22 10/500 2026-03-27 08:18 by hypershenger
[考研] 284求调剂 +11 junqihahaha 2026-03-26 12/600 2026-03-27 04:37 by wxiongid
[考研] 一志愿厦门大学化学学硕307求调剂 +8 y7czhao 2026-03-26 8/400 2026-03-26 19:51 by 不吃魚的貓
[考研] 279求调剂 +6 红衣隐官 2026-03-21 6/300 2026-03-26 18:32 by 不吃魚的貓
[考研] 289求调剂 +17 硕星赴 2026-03-23 17/850 2026-03-26 16:18 by 不吃魚的貓
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 材料与化工328分调剂 +6 。,。,。,。i 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:30 by 418490947
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 【2026考研调剂】制药工程 284分 求相关专业调剂名额 +4 袁奂奂 2026-03-25 8/400 2026-03-25 14:32 by lbsjt
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
[考研] 085600材料与化工调剂 +9 A-哆啦Z梦 2026-03-23 15/750 2026-03-25 11:18 by Ainin_
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 一志愿南大,0703化学,分数336,求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
信息提示
请填处理意见