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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 怎么判断PCR产物双酶切有没有切完全
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chs4502

金虫 (小有名气)

[求助] 怎么判断PCR产物双酶切有没有切完全 已有1人参与

PCR产物纯化以后直接双酶切，怎呢判断有没有切完全呢？注：酶切位点在产物两端。

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1楼 2015-12-29 07:47:02
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
chs4502: 金币+3 2015-12-29 17:12:36
引用回帖:
3楼: Originally posted by chs4502 at 2015-12-29 15:26:16
设计引物的时候忘记加保护碱基了，对酶切会有多大的影响？...

不加保护碱基对不同的酶影响不一样，如果一直连不上，可以先连到T载上再切。
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4楼2015-12-29 15:35:57
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
chs4502: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-12-29 15:27:00
因为酶切产物和PCR产物相差不大，一般都是通过连接转化，看连接转化率判断。只要你酶切体系没有问题，肯定可以酶切，即使没有完全酶切，只要在下一步能够连接转化成功就行。通过酶切载体确保你的酶没有问题，按照说明书推荐的体系加。
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2楼2015-12-29 11:06:14
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chs4502

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2015-12-29 11:06:14
因为酶切产物和PCR产物相差不大，一般都是通过连接转化，看连接转化率判断。只要你酶切体系没有问题，肯定可以酶切，即使没有完全酶切，只要在下一步能够连接转化成功就行。通过酶切载体确保你的酶没有问题，按照说 ...

设计引物的时候忘记加保护碱基了，对酶切会有多大的影响？
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3楼2015-12-29 15:26:16
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