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chs4502

金虫 (小有名气)

[求助] 怎么判断PCR产物双酶切有没有切完全 已有1人参与

PCR产物纯化以后直接双酶切,怎呢判断有没有切完全呢?注:酶切位点在产物两端。

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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

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chs4502: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-12-29 15:27:00
因为酶切产物和PCR产物相差不大,一般都是通过连接转化,看连接转化率判断。只要你酶切体系没有问题,肯定可以酶切,即使没有完全酶切,只要在下一步能够连接转化成功就行。通过酶切载体确保你的酶没有问题,按照说明书推荐的体系加。
2楼2015-12-29 11:06:14
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chs4502

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2015-12-29 11:06:14
因为酶切产物和PCR产物相差不大,一般都是通过连接转化,看连接转化率判断。只要你酶切体系没有问题,肯定可以酶切,即使没有完全酶切,只要在下一步能够连接转化成功就行。通过酶切载体确保你的酶没有问题,按照说 ...

设计引物的时候忘记加保护碱基了,对酶切会有多大的影响?
3楼2015-12-29 15:26:16
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
chs4502: 金币+3 2015-12-29 17:12:36
引用回帖:
3楼: Originally posted by chs4502 at 2015-12-29 15:26:16
设计引物的时候忘记加保护碱基了,对酶切会有多大的影响?...

不加保护碱基对不同的酶影响不一样,如果一直连不上,可以先连到T载上再切。
4楼2015-12-29 15:35:57
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