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Fanhua_yang

新虫 (初入文坛)

[求助] 救救我的细胞吧! 已有5人参与

我的细胞之前养一直挺好,突然有一天就不长了,大批死亡,具体情况是:细胞复苏后第二天贴壁挺好见图1,72小时再看就都死了见图2,特别焦急,请前辈们帮我看看问题出在哪里?我用的培养液是DMEM,10%胎牛血清,双抗,培养液一直很干净,没见里面有杂质或其它的东西

救救我的细胞吧!


救救我的细胞吧!-1


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yangkui123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
复苏后,培养72小时期间有没换液?看你72小时的照片貌似细胞都凋亡或者死了很多了…考虑一下是不是血清的问题,或者培养基在不经意间混了其他杂质…还有就是考虑一下冻存夜的问题,这个可能性小点…

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2楼2015-12-28 20:55:24
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yangkui123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

培养基的杂质可能是溶解在里面了…建议重新配置一下…这种情况,只能一点一点排查…

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3楼2015-12-28 20:57:19
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zcc爱化学

新虫 (小有名气)

你是24小时才去除DMSO吗?我们都是要么复苏时去除,要么不超过12小时换第一次液

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9楼2015-12-28 22:33:17
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Fanhua_yang

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yangkui123 at 2015-12-28 20:55:24
复苏后,培养72小时期间有没换液?看你72小时的照片貌似细胞都凋亡或者死了很多了…考虑一下是不是血清的问题,或者培养基在不经意间混了其他杂质…还有就是考虑一下冻存夜的问题,这个可能性小点…
...

谢谢楼上前辈的解答,我在24小时时换液了,换液是对是错呢!
还有我也怀疑过血清,换了一批做,结果还是这样,已经做了3次了,您说有可能是支原体污染吗?

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4楼2015-12-28 21:00:54
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Fanhua_yang

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yangkui123 at 2015-12-28 20:57:19
培养基的杂质可能是溶解在里面了…建议重新配置一下…这种情况,只能一点一点排查…

谢谢楼上前辈,这种情况第一次遇到,是只能一一排除了,到现在已经排除了一些因素,想听听有经验的大侠们的意见,我实在是不知道怎么办了

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5楼2015-12-28 21:04:08
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ivyvampire

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
测测支原体看看吧

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6楼2015-12-28 21:42:15
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ivyvampire

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

建议做个对照,一批换液一批不换,会不会是换液过程造成的

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7楼2015-12-28 21:43:49
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yangkui123

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Fanhua_yang at 2015-12-28 21:00:54
谢谢楼上前辈的解答,我在24小时时换液了,换液是对是错呢!
还有我也怀疑过血清,换了一批做,结果还是这样,已经做了3次了,您说有可能是支原体污染吗?
...

对于贴壁细胞,复苏后,勤换液是很有必要的~24h差不多是可以的····耐心一点,不要急~如果是支原体污染那就很麻烦了·····因为还要找到污染源在哪里,是血清?是配置的培养基?还是冻存的细胞本身就污染了?如果遇到这样的情况,如果细胞不是很珍贵,大家一般都直接扔掉了····
8楼2015-12-28 21:51:58
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western虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
曾经遇到过类似的现象,长的好好的传代几次就全飘起来死掉了。后来发现是血清的问题,换了血清就好了。你可以继续尝试换品质好一些的血清
ForDream!
10楼2015-12-29 11:59:17
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