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zrj123456

新虫 (小有名气)

[求助] i基因敲除需要的同源臂是越长效率越高吗?已有1人参与

同题,一直在做基因敲除,最近换了新方法,建议的同源臂是至少500bp,之前我构建了一个900bp的,怀疑是同源臂太长了,一直敲不出来,有可能吗?
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zrj123456

新虫 (小有名气)

谢谢大神,那我现在敲不掉,为了提高效率是不是应该增加长度?可是为什么文献上同一种方法都是用的500bp左右?没有可能是越长效率越低吗?
3楼2015-12-29 14:58:13
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科学小覃

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zrj123456: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-12-29 14:56:33
用同源重组得方法做基因敲除,左右同源臂最好在1000bp以上,同源臂越长,重组率越高。也不要超过1600,太长质粒构建困难,测序也不方便,(目前质粒测序一般一个读长在700-800bp之间,若超过1600则又要重新设计测序引物)。
生物科学
2楼2015-12-28 19:34:55
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zht930528

木虫 (正式写手)

麻辣王子

结合转移也是同源重组,360bp左右也敲掉过。
麻辣王子不爱做实验
4楼2015-12-29 18:34:34
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yq生活精灵

新虫 (正式写手)

5楼2015-12-29 18:36:26
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