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病毒plaque assay 不出现空斑!求助! 已有2人参与
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我用的病毒是AcNPV,具体实验步骤如下: 1. 把sf9细胞铺满整个六孔盘底部,吸走培养基,加入1ml病毒,浓度分别是10-3、10-4、10-5、10-6、10-7,另外一个孔不加病毒作为对照,放入27度培养箱接种1h. 2.吸走病毒悬液后,盖上一层终浓度为1%的agar胶2ml (2X media+低熔点琼脂糖+10%FBS,低熔点琼脂糖和2X medium各一半),温度保持在45度左右,保证细胞不被烫死。 3.待agar凝固后,在加入1ml新鲜细胞培养基(无FBS),保证细胞的存活 4.28度细胞培养箱5天之后观察 可以在接种高浓度病毒悬液中看到多角体,但是没有形成空斑,到底是哪个步骤出错了,请大神指教!~~~谢谢! |
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