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huanhui8786

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[交流] MTT实验问题加入DMSO后紫色结晶溶解后变成了红褐色

做MTT实验，加入DMSO后可见部分溶解的结晶，呈现紫色，但是用移液枪吹打混匀后，颜色变成了红褐色；用酶标仪的shaking功能混匀10分钟后也是红褐色。
另外一块板中多数呈现红褐色，但是有几个孔呈现除了正常的紫色（图片中蓝色标记）。
MTT实验我做了很多次，以前都是很正常的紫色，用酶标仪Scan模式测试，紫色的最大吸收波长在550nm，红褐色的最大吸收波长在500nm左右。
我有几个问题想不清楚，麻烦有做过的虫友帮忙，谢谢！
1.由于有个别孔还是出现了正常的紫色，是否说明不是MTT、DMSO、培养基、血清、PBS的原因呢？
2.对照组（最左边一列）也出现了红褐色，是否说明不是我加入的纳米粒子发生的作用？
3.出现紫色的孔是随机分布的，会是染菌的原因吗？出现红褐色的孔都染菌了？
4.做实验之前细胞培养室和培养箱都用75%清理消毒过，也执行了培养箱自带的灭菌程序，MTT实验我做过很多次，都很正常，按理来说不会出现操作引起的污染，还有那些因素会导致污染呢？

图片1.jpg

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1楼 2015-12-23 15:54:01

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HarveyWang

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
huanhui8786: 金币+2, 非常感谢！ 2015-12-25 16:53:46

主要是残留培养基的pH影响的显色。

参考文献在这里：
Wang, H., Wang, F., Tao, X., & Cheng, H. (2012). Ammonia-containing dimethyl sulfoxide: an improved solvent for the dissolution of formazan crystals in the 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) assay. Analytical biochemistry, 421(1), 324-326.