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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量PCR实验数据求助
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取个什么名啊

木虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量PCR实验数据求助 已有1人参与

我分别用目的基因与内参基因及阴性对照做了荧光定量的预实验，结果如下图，用了两对引物，第三附图中前一个峰是目的基因，后一个峰是内参基因的，这样的实验结果能用吗？

荧光定量PCR实验数据求助
IMG_20151222_131208.jpg


荧光定量PCR实验数据求助-1
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荧光定量PCR实验数据求助-2
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1楼 2015-12-22 14:04:39
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取个什么名啊

木虫 (正式写手)
引用回帖:
21楼: Originally posted by 足下客 at 2015-12-24 12:44:32
是加在一起的。一般我们先不加内参做一轮，然后再加入内参的引物和模板做一轮，这样可以看一下内参基因对目的基因扩增的影响。如果影响很大的话，这个内参就得调了，内参浓度要尽可能低一些...

你加在一起用的是探针法吗？还有就是你用染料法做的时候你用的体系是什么，方便告知一下吗？我买的宝生物的试剂盒，说明书上的仪器没有我现在用的仪器名称，他推荐的体系也没法参考。期待你的回复。
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22楼2015-12-24 20:35:22
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足下客

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看你第一幅图的扩增曲线，第一条曲线的Ct值那么靠前，显然是不对的。而且你的内参基因的扩增荧光增峰值怎么会那么低，整个扩增就有问题
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

取个什么名啊
2楼2015-12-22 15:54:41
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取个什么名啊

木虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 足下客 at 2015-12-22 15:54:41
看你第一幅图的扩增曲线，第一条曲线的Ct值那么靠前，显然是不对的。而且你的内参基因的扩增荧光增峰值怎么会那么低，整个扩增就有问题

第一条曲线的CT值是内参的。关于扩增荧光峰值，你做的是多少，内参的CT值怎么处理。求帮助
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3楼2015-12-22 19:27:00
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足下客

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 取个什么名啊 at 2015-12-22 19:27:00
第一条曲线的CT值是内参的。关于扩增荧光峰值，你做的是多少，内参的CT值怎么处理。求帮助...

Ct值我们一般都是在18以后，内参的浓度你自己要控制好，如果浓度很高，你要先用TE稀释。荧光增峰我们一般至少在1000-2000，大部分情况都在2500左右。不知道你扩的是DNA还是RNA，你的反应体系可能有问题
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4楼2015-12-23 09:10:35
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