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取个什么名啊

木虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量PCR实验数据求助 已有1人参与

我分别用目的基因与内参基因及阴性对照做了荧光定量的预实验,结果如下图,用了两对引物,第三附图中前一个峰是目的基因,后一个峰是内参基因的,这样的实验结果能用吗?

荧光定量PCR实验数据求助
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荧光定量PCR实验数据求助-1
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荧光定量PCR实验数据求助-2
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取个什么名啊

木虫 (正式写手)

引用回帖:
21楼: Originally posted by 足下客 at 2015-12-24 12:44:32
是加在一起的。一般我们先不加内参做一轮,然后再加入内参的引物和模板做一轮,这样可以看一下内参基因对目的基因扩增的影响。如果影响很大的话,这个内参就得调了,内参浓度要尽可能低一些...

你加在一起用的是探针法吗?还有就是你用染料法做的时候你用的体系是什么,方便告知一下吗?我买的宝生物的试剂盒,说明书上的仪器没有我现在用的仪器名称,他推荐的体系也没法参考。期待你的回复。
22楼2015-12-24 20:35:22
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足下客

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看你第一幅图的扩增曲线,第一条曲线的Ct值那么靠前,显然是不对的。而且你的内参基因的扩增荧光增峰值怎么会那么低,整个扩增就有问题

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2015-12-22 15:54:41
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取个什么名啊

木虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 足下客 at 2015-12-22 15:54:41
看你第一幅图的扩增曲线,第一条曲线的Ct值那么靠前,显然是不对的。而且你的内参基因的扩增荧光增峰值怎么会那么低,整个扩增就有问题

第一条曲线的CT值是内参的。关于扩增荧光峰值,你做的是多少,内参的CT值怎么处理。求帮助
3楼2015-12-22 19:27:00
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足下客

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 取个什么名啊 at 2015-12-22 19:27:00
第一条曲线的CT值是内参的。关于扩增荧光峰值,你做的是多少,内参的CT值怎么处理。求帮助...

Ct值我们一般都是在18以后,内参的浓度你自己要控制好,如果浓度很高,你要先用TE稀释。荧光增峰我们一般至少在1000-2000,大部分情况都在2500左右。不知道你扩的是DNA还是RNA,你的反应体系可能有问题
4楼2015-12-23 09:10:35
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