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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 免疫实验 » 免疫沉淀的重轻链干扰如何排除
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2009wqg

新虫 (小有名气)

[交流] 免疫沉淀的重轻链干扰如何排除 已有2人参与

做免疫沉淀时，如果靶蛋白大小刚好在重链附近（50~55kDa）或轻链附近（~30kDa）时，显影后不太好区分到底是靶蛋白、还仅仅是抗体的重链/轻链。
本人目前做法：采用HRP-ProA和鼠抗兔轻链二抗，两种替换使用：靶蛋白如果在重链附近，就用鼠抗兔轻链二抗（理论上只结合轻链，但实际上还是对重链有一些结合）；
靶蛋白如果在轻链附近或其他大小，就用HRP-ProA（理论上对轻链结合非常弱，但实际上还是比较强）。
    不知各位有什么更好的解决办法吗？
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1楼 2015-12-21 11:18:19
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amyjetsci

无虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也遇到过这情况 ，做了几次实验还是一样的结果，后用Abbkine的产品IPKine  一种可以识别IgG分子的轻链部分和重链分子，有效避免了二抗与样本内免疫球蛋白分子的非特异性杂交，提高实验结果
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3楼2016-12-01 11:40:57
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siriusxuan

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有一种二抗，只识别非变性的r链，你可以试试。
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此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
2楼2015-12-22 10:50:45
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