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2009wqg

新虫 (小有名气)

[交流] 免疫沉淀的重轻链干扰如何排除 已有2人参与

做免疫沉淀时,如果靶蛋白大小刚好在重链附近(50~55kDa)或轻链附近(~30kDa)时,显影后不太好区分到底是靶蛋白、还仅仅是抗体的重链/轻链。
本人目前做法:采用HRP-ProA和鼠抗兔轻链二抗,两种替换使用:靶蛋白如果在重链附近,就用鼠抗兔轻链二抗(理论上只结合轻链,但实际上还是对重链有一些结合);
靶蛋白如果在轻链附近或其他大小,就用HRP-ProA(理论上对轻链结合非常弱,但实际上还是比较强)。
    不知各位有什么更好的解决办法吗?
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siriusxuan

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
有一种二抗,只识别非变性的r链,你可以试试。
此座可言轻社稷,江山万里起风尘。
2楼2015-12-22 10:50:45
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amyjetsci

无虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也遇到过这情况 ,做了几次实验还是一样的结果,后用Abbkine的产品IPKine  一种可以识别IgG分子的轻链部分和重链分子,有效避免了二抗与样本内免疫球蛋白分子的非特异性杂交,提高实验结果
3楼2016-12-01 11:40:57
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