24小时热门版块排行榜    

查看: 1392  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

RNA世界

铁虫 (初入文坛)

[求助] DNA粗提取的问题

我在做番茄的稳定转基因。
然后现在是需要提取DNA做PCR鉴定
我的提取方法大概是这样的。
在1.5ml离心管里加100微升的无菌水,然后加入植物叶片样品,研磨匀浆
加入150微升的细胞裂解液,成分我忘了,含有EDTA和Tris等
然后加入150微升异丙醇。-20度沉淀DNA,大概一个小时
14000rpm 2分钟 离心,取上清
用75%乙醇洗两次,每次都是14000rpm 2分钟
最后,晾干后,用dd水溶解。
然后现在的情况是PCR后没有条带。我怀疑是DNA提取的问题。
这个过程只是粗提,并没有纯化,因为PCR好像也不要求样品有多高的纯度
想请大家帮我看看,问题可能会出在哪里呢?
回复此楼
谋事在人,成事在天
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

summerdayl

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

先测DNA的浓度,如果浓度比较低,那就是提的DNA的问题

如果浓度比较高,那问题就是PCR, PCR的问题可能是出在引物,还有可能是你扩增的片段浓度比较低,可以试一下用第一次PCR的产物作为template再跑一次PCR, 可能就会有条带了
7楼2019-01-26 07:00:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 RNA世界 的主题更新
信息提示
请填处理意见