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重叠延伸PCR后重组菌测序老是失败
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如题，利用重叠延伸PCR突变后连接到pet28a质粒，转入BL21（DE3）中，将菌落PCR呈阳性的菌落提质粒，质粒大小与未突变的工程菌质粒大小一致，使用质粒PCR也呈阳性（通用T7引物及特异性引物都有验证），开始只送菌液测序失败，后来菌液及质粒都有送测，结果还是失败，以为是送测的菌不纯，所以又划线挑单菌落送测（PCR及提质粒验证过），结果还是失败= =！下图是最近一次测序的峰图，请大家帮忙分析下原因，卡在这好久了= =！ 搜狗截图20151218132946.png |
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