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ljyd

新虫 (初入文坛)

[求助] 大鼠原代肝细胞分离，活率一直上不去，求助大神！ 已有1人参与

从六月就开始学做大鼠原代肝细胞的分离，断断续续做了快三个月了，活率仍然很不稳定。采用的是 Selgen 两步胶原酶灌注法，过300目的细胞筛后用台盼蓝拒染法来检测细胞活率。除了已经发现的，胶原酶灌注时间、温度、手术操作时间等因素外，最近经常发现类似下图这样大团的聚集在一起的死细胞。实验室师姐认为是离心后没有吹散，可是活细胞并不会像死细胞那样聚集。能不能请做过这类实验的大神指点一二，万分感谢！
大鼠原代肝细胞分离，活率一直上不去，求助大神！
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1楼 2015-12-18 01:18:37
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匿名

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感谢参与，应助指数 +1
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2楼2015-12-18 01:23:10
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ljyd

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by becklittle at 2015-12-18 01:23:10
可是最影响存活率的就是胶原酶灌注时间、温度、手术操作时间等因素

多谢回复！这个我们试过很多次，有取得比较好效果的。现在比较麻烦的就是这个大团，大团的死细胞，如果能找出原因解决的话。只剩游离的活细胞占比就很高了。

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3楼2015-12-18 08:40:00
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匿名

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4楼2015-12-18 09:13:19
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ljyd

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by becklittle at 2015-12-18 09:13:19
怎么离心的？我做的时候也会有死细胞，但是换液可以换掉没感觉多影响活细胞

4度，50xg，5分钟，三次。也试过1000rpm，500rpm，300rpm，三分钟各一次。效果都差不多，都会出现这种死细胞聚集的情况。

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5楼2015-12-18 10:11:06
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匿名

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6楼2015-12-18 12:59:09
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ljyd

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by becklittle at 2015-12-18 12:59:09
不知道咋会聚集，不过lz染的这个很漂亮呀，我用taipanlan染出来没那么高的辨识度，lz是怎么染的？

貌似是我求助啊！大哥！你试着用沸水煮胎盘蓝原液，然后再放水浴锅。顺便问一下，您灌流出来，细胞活率一般能有多少？

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7楼2015-12-19 10:46:39
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匿名

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8楼2015-12-19 11:33:33
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ljyd

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by becklittle at 2015-12-19 11:33:33
一半
...

噗！我一般都到60，还有几次80的，老板还是不满意。我还是去屎吧！

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9楼2015-12-19 12:04:41
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yglbuct

铜虫 (小有名气)
现在我们公司刚好在做这个，给礼来做的，有需要可以联系，有COA，流式，反正给礼来的质量肯定是OK的。allcells公司，021-64853421-8020
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10楼2015-12-22 15:32:50
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