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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 医学 » 基础 » 大鼠原代肝细胞分离，活率一直上不去，求助大神！
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ljyd

新虫 (初入文坛)

[求助] 大鼠原代肝细胞分离，活率一直上不去，求助大神！ 已有1人参与

从六月就开始学做大鼠原代肝细胞的分离，断断续续做了快三个月了，活率仍然很不稳定。采用的是 Selgen 两步胶原酶灌注法，过300目的细胞筛后用台盼蓝拒染法来检测细胞活率。除了已经发现的，胶原酶灌注时间、温度、手术操作时间等因素外，最近经常发现类似下图这样大团的聚集在一起的死细胞。实验室师姐认为是离心后没有吹散，可是活细胞并不会像死细胞那样聚集。能不能请做过这类实验的大神指点一二，万分感谢！
大鼠原代肝细胞分离，活率一直上不去，求助大神！
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1楼 2015-12-18 01:18:37
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ljyd

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by becklittle at 2015-12-18 09:13:19
怎么离心的？我做的时候也会有死细胞，但是换液可以换掉没感觉多影响活细胞

4度，50xg，5分钟，三次。也试过1000rpm，500rpm，300rpm，三分钟各一次。效果都差不多，都会出现这种死细胞聚集的情况。

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5楼2015-12-18 10:11:06
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匿名

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2楼2015-12-18 01:23:10
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ljyd

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by becklittle at 2015-12-18 01:23:10
可是最影响存活率的就是胶原酶灌注时间、温度、手术操作时间等因素

多谢回复！这个我们试过很多次，有取得比较好效果的。现在比较麻烦的就是这个大团，大团的死细胞，如果能找出原因解决的话。只剩游离的活细胞占比就很高了。

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3楼2015-12-18 08:40:00
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匿名

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4楼2015-12-18 09:13:19
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