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dra04

铁虫 (初入文坛)

[求助] 在做定点突变时,有其他位点碱基发生突变

用构建好的质粒做模板,在做定点突变时,一个模板虽然目的位点成功突变,但在距离突变位点大约60、140的碱基处也发生了突变;另一个模板也成功突变,但在突变位点大约25bp处插入了不到50个碱基,请求各位大神各位解答一下哈?目的质粒大约不到6000bp
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娃哈哈
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北国佳人

铜虫 (小有名气)

换高质量的酶,,用好的KIT 作
努力的小蜜蜂
2楼2015-12-20 11:40:14
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dra04

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 北国佳人 at 2015-12-20 11:40:14
换高质量的酶,,用好的KIT 作

好的,谢谢。我还想问一下,就是我从文库中PCR出来DNA片段,用了宝生物的Hs Taq、ExTaq Mix、Primestar HS三种酶,肝和肾的两种文库,然后切胶回收,连接T载体,挑单克隆测序,结果与NCBI上查得序列有1~4个碱基的突变。每个单克隆之间的突变都不一样,导致相应的氨基酸也改变了,这应该怎么办啊?
娃哈哈
3楼2016-01-07 21:18:13
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dra04

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 北国佳人 at 2015-12-20 11:40:14
换高质量的酶,,用好的KIT 作

好的,谢谢。我还想问一个问题,我从文库中PCR出目的基因片段,肝和肾两种文库,宝生物的Hs Taq、 ExTaq、 Primestar HS三种酶,退火60度,然后切胶回收,用的Golden View,连接T载体,挑取单克隆,测序结果显示每个单克隆都有1~4个碱基突变,互相之间的突变碱基位置也不同,导致相应氨基酸改变。测序峰图比较好。我应该怎么办?
娃哈哈
4楼2016-01-07 21:22:32
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七琦绮弃

新虫 (初入文坛)

我最近实验也出现了类似问题,请问楼主有解决吗
5楼2018-08-09 20:16:58
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