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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 在做定点突变时，有其他位点碱基发生突变
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dra04

铁虫 (初入文坛)

[求助] 在做定点突变时，有其他位点碱基发生突变

用构建好的质粒做模板，在做定点突变时，一个模板虽然目的位点成功突变，但在距离突变位点大约60、140的碱基处也发生了突变；另一个模板也成功突变，但在突变位点大约25bp处插入了不到50个碱基，请求各位大神各位解答一下哈？目的质粒大约不到6000bp
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娃哈哈
1楼 2015-12-17 21:39:35
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北国佳人

铜虫 (小有名气)
换高质量的酶，，用好的KIT 作
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努力的小蜜蜂
2楼2015-12-20 11:40:14
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dra04

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 北国佳人 at 2015-12-20 11:40:14
换高质量的酶，，用好的KIT 作

好的，谢谢。我还想问一下，就是我从文库中PCR出来DNA片段，用了宝生物的Hs Taq、ExTaq Mix、Primestar HS三种酶，肝和肾的两种文库，然后切胶回收，连接T载体，挑单克隆测序，结果与NCBI上查得序列有1～4个碱基的突变。每个单克隆之间的突变都不一样，导致相应的氨基酸也改变了，这应该怎么办啊？
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娃哈哈
3楼2016-01-07 21:18:13
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dra04

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 北国佳人 at 2015-12-20 11:40:14
换高质量的酶，，用好的KIT 作

好的，谢谢。我还想问一个问题，我从文库中PCR出目的基因片段，肝和肾两种文库，宝生物的Hs Taq、 ExTaq、 Primestar HS三种酶，退火60度，然后切胶回收，用的Golden View，连接T载体，挑取单克隆，测序结果显示每个单克隆都有1～4个碱基突变，互相之间的突变碱基位置也不同，导致相应氨基酸改变。测序峰图比较好。我应该怎么办？
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娃哈哈
4楼2016-01-07 21:22:32
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七琦绮弃

新虫 (初入文坛)
我最近实验也出现了类似问题，请问楼主有解决吗
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5楼2018-08-09 20:16:58
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