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humants

金虫 (正式写手)

[交流] [求助]Ni柱选择

[求助]Ni柱选择。
各位虫友,大家好,我在做原核表达,sds-page显示蛋白已经表达,下面打算做纯化。

我的蛋白在设计的时候加上了6×his tag,所以我打算用Ni柱去纯化,纯化后打算复性做活性测定,所以想让他纯度大一点,但是我不知道选哪类的Ni柱,市售的有IDA和NTA?所以我打算问一下几个问题。注:我的蛋白分子量36KDa,pI=6.32,表达量占总蛋白的约20%

1.我是选择IDA的还是NTA?
2.是应该买预装柱的还是直接买填料?是不是自己填料和与填料的效果差比啊很大?(我是新手,实验室也没有懂得...)
3.本人比较爱国,呵呵...打算买国产的,不知道哪家的比较耐用?

恳请大家的解答,先谢谢了。
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humants

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by sumertansy at 2008-9-23 21:54:
可以用NTA,直接买填料相对便宜,novagen的10毫升一两千块钱,预装柱比较贵不合算,效果不会有太大差异,你可以自己做个柱子。买玻璃层析柱自己装填就可以了,不过这种玻璃层析柱比较大,浪费填料,我们用一次性注 ...

你好,我用来洗脱的咪唑需要用什么纯度的?生化纯,超纯,还是用普通的分析纯?
4楼2008-09-24 10:54:15
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sumertansy

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
humants(金币+5,VIP+0):谢谢,你的帮助。
可以用NTA,直接买填料相对便宜,novagen的10毫升一两千块钱,预装柱比较贵不合算,效果不会有太大差异,你可以自己做个柱子。买玻璃层析柱自己装填就可以了,不过这种玻璃层析柱比较大,浪费填料,我们用一次性注射器做柱子,节省填料。你们要是有蛋白核酸检测仪,洗和洗脱就很方便了。现在好像没有国产的,很多公司都是代理进口的。
蛋白分子量36KDa,表达量占总蛋白的约20%, 纯化应该没有什么问题,pET系统的表达都应该在达到百分之二三十。
2楼2008-09-23 21:54:08
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sumertansy

铜虫 (小有名气)

Ni柱现在好像没有国产的,很多公司都是代理进口的。
3楼2008-09-23 22:16:33
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sumertansy

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by humants at 2008-9-24 10:54:

你好,我用来洗脱的咪唑需要用什么纯度的?生化纯,超纯,还是用普通的分析纯?

我们用的是分析纯,没有生什么问题
5楼2008-09-24 11:46:28
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