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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » [求助]Ni柱选择
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humants

金虫 (正式写手)

[交流] [求助]Ni柱选择

[求助]Ni柱选择。
各位虫友，大家好，我在做原核表达，sds-page显示蛋白已经表达，下面打算做纯化。

我的蛋白在设计的时候加上了6×his tag，所以我打算用Ni柱去纯化，纯化后打算复性做活性测定，所以想让他纯度大一点，但是我不知道选哪类的Ni柱，市售的有IDA和NTA？所以我打算问一下几个问题。注：我的蛋白分子量36KDa，pI=6.32，表达量占总蛋白的约20%

1.我是选择IDA的还是NTA？
2.是应该买预装柱的还是直接买填料？是不是自己填料和与填料的效果差比啊很大？（我是新手，实验室也没有懂得...）
3.本人比较爱国，呵呵...打算买国产的，不知道哪家的比较耐用？

恳请大家的解答，先谢谢了。
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1楼 2008-09-23 17:00:50
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sumertansy

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
humants(金币+5,VIP+0):谢谢，你的帮助。
可以用NTA，直接买填料相对便宜，novagen的10毫升一两千块钱，预装柱比较贵不合算，效果不会有太大差异，你可以自己做个柱子。买玻璃层析柱自己装填就可以了，不过这种玻璃层析柱比较大，浪费填料，我们用一次性注射器做柱子，节省填料。你们要是有蛋白核酸检测仪，洗和洗脱就很方便了。现在好像没有国产的，很多公司都是代理进口的。
蛋白分子量36KDa，表达量占总蛋白的约20%， 纯化应该没有什么问题，pET系统的表达都应该在达到百分之二三十。
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2楼2008-09-23 21:54:08
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sumertansy

铜虫 (小有名气)
Ni柱现在好像没有国产的，很多公司都是代理进口的。
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3楼2008-09-23 22:16:33
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humants

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by sumertansy at 2008-9-23 21:54:
可以用NTA，直接买填料相对便宜，novagen的10毫升一两千块钱，预装柱比较贵不合算，效果不会有太大差异，你可以自己做个柱子。买玻璃层析柱自己装填就可以了，不过这种玻璃层析柱比较大，浪费填料，我们用一次性注 ...

你好，我用来洗脱的咪唑需要用什么纯度的？生化纯，超纯，还是用普通的分析纯？
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4楼2008-09-24 10:54:15
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sumertansy

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by humants at 2008-9-24 10:54:

你好，我用来洗脱的咪唑需要用什么纯度的？生化纯，超纯，还是用普通的分析纯？

我们用的是分析纯，没有生什么问题
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5楼2008-09-24 11:46:28
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lg1072

铜虫 (初入文坛)
GE的柱子，或是qiagen的，再加一台FPLC，搞定很随
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6楼2008-09-24 18:35:24
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humants

金虫 (正式写手)
我如果自己装柱用玻璃柱？还是其他材料的？
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7楼2008-10-08 08:00:58
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