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changmaster

新虫 (小有名气)

[求助] qpcr模板问题 已有2人参与

最近在做荧光定量,很是苦恼模板cDNA的问题,每次反应都要加2微升,但是每次反转也就得到20微升而已,要验证基因多的话,模板根本不够,但反转录试剂盒又很贵。。。。
请问,大家对反转录完的20微升cDNA都稀释了吗,稀释后,跑荧光定量效果会不会不好呢?
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兽医做科研

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们实验室做荧光定量之前都是要摸一个稀释浓度的,然后稀释后做,这样可以节省样品,对结果应该不会有什么影响,只要Ct值在可信范围内就可以了

发自小木虫Android客户端
3楼2015-12-17 16:39:17
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奇怪人生123

银虫 (小有名气)

之前每次做反转录,会同时做好多管,大约20管左右,就是20*20微升。你一次就反转录一管,20微升吗?每一次荧光定量之前都反转录一次,这岂不是麻烦的要死啊.......
实时荧光定量PCR(TaqMan探针法)欢迎和大家探讨~
2楼2015-12-17 16:34:52
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射手鱼卷

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以用10微升的体系,我们实验室用的是Thermo的试剂
Mix  5微升
水   3.5微升
F      0.5微升
R    0.5微升
cDNA  0.5微升
4楼2016-01-10 22:58:35
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