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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » qpcr模板问题
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changmaster

新虫 (小有名气)

[求助] qpcr模板问题 已有2人参与

最近在做荧光定量，很是苦恼模板cDNA的问题，每次反应都要加2微升，但是每次反转也就得到20微升而已，要验证基因多的话，模板根本不够，但反转录试剂盒又很贵。。。。
请问，大家对反转录完的20微升cDNA都稀释了吗，稀释后，跑荧光定量效果会不会不好呢？
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做自己，不试图成为任何人
1楼 2015-12-17 15:20:49
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兽医做科研

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们实验室做荧光定量之前都是要摸一个稀释浓度的，然后稀释后做，这样可以节省样品，对结果应该不会有什么影响，只要Ct值在可信范围内就可以了

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3楼2015-12-17 16:39:17
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奇怪人生123

银虫 (小有名气)
之前每次做反转录，会同时做好多管，大约20管左右，就是20*20微升。你一次就反转录一管，20微升吗？每一次荧光定量之前都反转录一次，这岂不是麻烦的要死啊.......
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实时荧光定量PCR（TaqMan探针法）欢迎和大家探讨~
2楼2015-12-17 16:34:52
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射手鱼卷

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以用10微升的体系，我们实验室用的是Thermo的试剂
Mix  5微升
水   3.5微升
F      0.5微升
R    0.5微升
cDNA  0.5微升
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4楼2016-01-10 22:58:35
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