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xtmgah31

银虫 (小有名气)

[交流] PCR条带弱

今天做了一个PCR,扩增微生物的16S rDNA的V3区,
循环数30,20微升的体系,取3微升跑电泳检测,结果条带不是很亮,请大家帮忙分析下原因。

[ Last edited by 350784478 on 2009-8-15 at 14:51 ]
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melissaqin

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可以把循环次数增多,35或40次循环都可以,我一般都是35次循环,循环次数越多,PCR中DNA产物也会越多,。
EB的使用时间,也会影响到条带的亮度。
还有,我觉得Loding buffer 的用量,稍微多加点,可以沉淀的DNA就会多点,条带也就会亮点。
13楼2009-08-29 21:29:54
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU

3微升的上样量似乎少了点哦,很亮不太可能的。不知道楼主要多亮哦。要拍照的话那就多上样。
活着就要让人感受到你的存在。
2楼2008-09-22 22:09:38
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老鼠大王

条带不太亮的原因很多。模板量,引物本身,以及扩增体系中Tap酶的含量等,找出可能原因。多做几次。呵呵看看 结果如何!我们实验室一般3-4,结果都还蛮好的
4楼2008-09-24 08:49:24
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qiaolianwen

铜虫 (正式写手)

如果你的maker加的多的话你的条带也会受影响,因为看胶的时候焦距是以maker最亮的带为标准的!
如果没有非特异性条带,也可以增加循环数!

[ Last edited by qiaolianwen on 2008-9-24 at 10:29 ]
结束了,哪些没有自我的日子;新生活,开始了!
5楼2008-09-24 10:27:37
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