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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】pMD18-T转化大肠杆菌
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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董文娟

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】pMD18-T转化大肠杆菌

最近在做pMD18-T转化大肠杆菌，做了两次
第一次转 一个菌都没有长（可能抗生素的浓度有问题）
第二次转 12小时后没有长 但当培养了17小时后，发现平板上密密麻麻都是菌
第一次转和第二次转操作区别有两点
一、收集一小时培养的菌液所用转速不同（第一次5000，第二次4000,均离心2分钟)
二、热激后冰浴时间不同（第一次4分钟，第二次5-6分钟）
想请教：第二次平板上为什么会出现那么多菌，而12H时根本没有？



另
有时候平板上会长很多的小点点（与统一平板中的菌落比起来很小），师姐说是什么DNA。。。。有没有人遇到这种情况？那到底是什么？造成这种现象的原因是什么？
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1楼 2008-09-22 15:19:01
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xipha

木虫 (正式写手)
问下宿主菌是什么株？抗生素终浓度多少？
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2楼2008-09-22 21:01:06
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-15 12:36
可能你的菌株就是要到12小时才长；也有可能不是你要的菌，在12小时后开始长杂菌，太小的密密麻麻的很有可能不是你要的菌。这些跟你的抗生素的终浓度有关系的。还有就是转化效率，有时候就长两三个菌落，可就是目的菌。
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活着就要让人感受到你的存在。
3楼2008-09-22 22:15:55
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superarm

金虫 (正式写手)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-15 12:36
一、收集一小时培养的菌液所用转速不同（第一次5000，第二次4000,均离心2分钟)
二、热激后冰浴时间不同（第一次4分钟，第二次5-6分钟）
这两点没啥区别，不影响试验，把第二次筛下菌就知道是不是阳性克隆了。
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与分子生物学的同仁一起遨游科学的海洋！
4楼2008-09-23 10:43:45
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-15 12:36
amp 的浓度一般为100mg/L 转化放在冰上的时间没有影响 离不离心都可以
你可以用蓝白筛选 只有有蓝白斑说明你长的菌就是正常的
如果你抗生素浓度高 菌斑出现的时间就会长一点
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5楼2008-09-23 11:07:54
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
能长那么多出来，就不用离心收集了吧。那些小点点的菌落应该是所谓的卫星菌落，就是抗生素抑制作用减弱后长起来的，一般不做筛选考虑。
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金币是赌出来的
6楼2008-09-23 13:55:42
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yierangel

金虫 (小有名气)
有可能是抗生素失效，有时是会长出卫星菌落的，楼主可以重新配制
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7楼2008-09-23 15:42:52
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董文娟

金虫 (小有名气)
谢谢大家
所用菌种是DH5a
现在我怀疑两次用的平板中的AMP浓度是不一样的
因为是很久之前倒的平板

弱弱地问下：卫星菌落 是什么？
                 平板放于4度太久，抗生素会不会分解？或失去作用效果？
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8楼2008-09-23 20:26:16
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董文娟

金虫 (小有名气)

谢谢大家

谢谢大家
所用菌种是DH5a
现在我怀疑两次用的平板中的AMP浓度是不一样的
因为是很久之前倒的平板

弱弱地问下：卫星菌落 是什么？
                 平板放于4度太久，抗生素会不会分解？或失去作用效果？
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9楼2008-09-23 20:27:09
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zhaoxiag

银虫 (小有名气)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-15 12:37
平板放4度一两个星期内是没影响的
但最好不要放很长时间
最好用新鲜的培养基比较好
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10楼2008-09-23 23:01:33
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