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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】pMD18-T转化大肠杆菌
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董文娟

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】pMD18-T转化大肠杆菌

最近在做pMD18-T转化大肠杆菌，做了两次
第一次转 一个菌都没有长（可能抗生素的浓度有问题）
第二次转 12小时后没有长 但当培养了17小时后，发现平板上密密麻麻都是菌
第一次转和第二次转操作区别有两点
一、收集一小时培养的菌液所用转速不同（第一次5000，第二次4000,均离心2分钟)
二、热激后冰浴时间不同（第一次4分钟，第二次5-6分钟）
想请教：第二次平板上为什么会出现那么多菌，而12H时根本没有？



另
有时候平板上会长很多的小点点（与统一平板中的菌落比起来很小），师姐说是什么DNA。。。。有没有人遇到这种情况？那到底是什么？造成这种现象的原因是什么？
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1楼 2008-09-22 15:19:01
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superarm

金虫 (正式写手)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-15 12:36
一、收集一小时培养的菌液所用转速不同（第一次5000，第二次4000,均离心2分钟)
二、热激后冰浴时间不同（第一次4分钟，第二次5-6分钟）
这两点没啥区别，不影响试验，把第二次筛下菌就知道是不是阳性克隆了。
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与分子生物学的同仁一起遨游科学的海洋！
4楼2008-09-23 10:43:45
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xipha

木虫 (正式写手)
问下宿主菌是什么株？抗生素终浓度多少？
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2楼2008-09-22 21:01:06
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-15 12:36
可能你的菌株就是要到12小时才长；也有可能不是你要的菌，在12小时后开始长杂菌，太小的密密麻麻的很有可能不是你要的菌。这些跟你的抗生素的终浓度有关系的。还有就是转化效率，有时候就长两三个菌落，可就是目的菌。
赞一下(6人) 回复此楼
活着就要让人感受到你的存在。
3楼2008-09-22 22:15:55
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-15 12:36
amp 的浓度一般为100mg/L 转化放在冰上的时间没有影响 离不离心都可以
你可以用蓝白筛选 只有有蓝白斑说明你长的菌就是正常的
如果你抗生素浓度高 菌斑出现的时间就会长一点
赞一下(6人) 回复此楼
5楼2008-09-23 11:07:54
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