应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » ClaI酶切重组载体切不开，请问是什么原因啊？！！！急！急！！！
51/1返回列表
查看: 3153  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

andyshang

木虫 (小有名气)

[求助] ClaI酶切重组载体切不开，请问是什么原因啊？！！！急！急！！！ 已有2人参与

我的载体经ClaI、XhoI酶切后连进去了一目的片段，测序显示酶切位点没有发生突变，但是我再用ClaI酶切此重组载体时却怎么也切不开了请问各位前辈这是什么原因啊？！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-12-10 23:09:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

andyshang

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 肥猫p at 2015-12-12 21:37:37
最大可能是酶切位点被甲基化了。Cla I对Dam甲基化敏感。你看看是不是你连接后，Cla I酶切位点前的一个碱基是G或者酶切位点后的一个碱基是C。

恩恩，连接后ClaI酶切位点前的碱基是G，那怎么才能去掉这种甲基化呢？我这个酶切位点后续的实验中还会用到~
赞一下 回复此楼
5楼2015-12-12 22:40:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

czfscf

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
andyshang: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-12-15 22:00:48
原因？可能你酶切过程有问题 也可以能你的载体本身有问题 把体系贴出来 人家才能帮你解答
赞一下(1人) 回复此楼
Ecological Genomics；the scientific walking hormone
2楼2015-12-11 02:06:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

andyshang

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by czfscf at 2015-12-11 02:06:38
原因？可能你酶切过程有问题 也可以能你的载体本身有问题 把体系贴出来 人家才能帮你解答

20ul的酶切体系，质粒的量是300ng，claI（thermo公司的）的用量是0.3ul,酶切时间是10小时。
赞一下 回复此楼
3楼2015-12-12 10:39:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肥猫p

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
andyshang: 金币+30, ★★★★★最佳答案 2015-12-15 22:01:17
最大可能是酶切位点被甲基化了。Cla I对Dam甲基化敏感。你看看是不是你连接后，Cla I酶切位点前的一个碱基是G或者酶切位点后的一个碱基是C。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2015-12-12 21:37:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学硕318求调剂 +4 February_Feb 2026-03-01 4/200 2026-03-01 22:52 by 一休哥FU
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 8/400 2026-03-01 22:50 by jian_
[考研] 0856调剂 +5 刘梦微 2026-02-28 5/250 2026-03-01 22:30 by wang_dand
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分，求调剂 +3 wsl111 2026-03-01 3/150 2026-03-01 21:38 by ms629
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 6/300 2026-03-01 21:24 by cgyzqwn
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
[考研] 0857调剂 +3 一ll半 2026-02-28 3/150 2026-03-01 18:32 by 热情沙漠
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 284求调剂 +6 天下熯 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:19 by Ducount.Y
[考研] 材料284求调剂，一志愿郑州大学英一数二专硕 +10 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 10/500 2026-03-01 14:12 by yc258
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭