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插入质粒启动子下游的是DNA模板链还是编码链？ 已有4人参与
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各位大侠： 小弟菜鸟，被2个问题困得茶饭不思，恳请各位大侠鼎力相助： 1.构建质粒时，我们通用genebank上查到的mRNA序列插入质粒，并置于启动子下端，进行转录和翻译表达。但这2天犯浑了，突然想，质粒首先要将插入片段转录成mRNA（即跟genebank上查到的序列一致的序列），然后以mRNA为模板进行翻译。但转录都是以DNA模板链转录成mRNA,所以插入质粒的序列应该是mRNA互补的那条链，即模板链，而不是genebank上查到的mRNA序列，但我们通常都是将mRNA序列扩增后插入，并置于启动子下，这是怎么回事？是不是我以前都做错了？一下糊涂了。再者，启动子是与RNA聚合酶结合的地方，从而启动转录，故，启动子也应位于模板链而不是位于编码链，可启动子就是位于编码基因5端上游，这是为何？彻底糊涂！ 2.表达质粒通常都有一个强有力地启动子并设计好了各种表达调控原件，以有利于基因转录与表达。但外源基因在经启动子启动转录成mRNA后，单链mRNA是不是就跟质粒脱离了，从而在胞质内进行翻译，那这样，质粒那些表达调控原件又如何能调控mRNA的翻译表达呢？越想越糊涂，望各位大侠不吝赐教！非常非常感谢大家！ |
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 虫友问答-分子生物 |
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这个朋友提的问题很有意思，很多人估计从未想过这是个什么问题。 分子生物学上说，转录的时候，RNA polymerase从promoter启动，以DNA模板的一条链作为模板，合成和模板互补配对的链即RNA产物，这条链于是叫做模板链。但是这个问题似乎没有什么实际应用价值，我们在克隆基因，做体外转录等等的时候，从genebank拿到一条序列，然后装上酶切位点，唰唰插到质粒的启动子下游就可以了，转录出来的自然就是genebank上显示的那条序列。 直到我遇到一个问题，在做RNA体外转录的时候，当需要精确计算RNA产物的大小，面对酶切得到的这样一个模板，产生的RNA是什么呢？ eg： 5’-T7 promoter-XXXXXXXXTCTAGA-3‘ 3‘-T7 promoter-XXXXXXXXAGATCT-5’ 这样一个产物大家都知道，转录产物一定是GGG-XXXXXXXXTCTAGA 但是面对酶切产物，模板变成了 5’-T7 promoter-XXXXXXXXT-3‘ 3‘-T7 promoter-XXXXXXXXAGATC-5’ RNA转录出来，是GGG-XXXXXXXXT？还是GGG-XXXXXXXXTCTAG？ 或者为什么，我们把从genebank上拿来的序列，装到载体的promoter下方，就一定转录出来我们插入的序列？ 所以我们装进入的到底是什么序列？ 这里面应该是有一个约定俗成的问题，即，genebank上给出的是mRNA，是翻译的模板，没有问题。 但是我们以这条链得到的DNA，跟mRNA方向一致的那条链并非载体promoter的模板链，而是非模板链 也就是说，载体上的promoter，是以插入DNA的另一条链，也就是跟mRNA互补的那条链为模板进行转录的 所以上面那个不平齐的模板，产生的ＲＮＡ应该是GGG-XXXXXXXXTCTAG |
3楼2015-12-10 10:58:19
xuanrufeng
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