| 查看: 499 | 回复: 8 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 xuehu2008 的 5 个金币 | |||
xuehu2008铜虫 (正式写手)
|
[交流]
求教高手关于RT-PCR
|
||
|
我最近克隆一个人源的蛋白，我以前没有做过真核的分子克隆，所以感觉没有头绪，现在求教高手以下几个问题： 1.是先用oligo（dT）作随机引物从总的RNA 上扩增出总的cDNA后再以此为模板设计目的基因引物扩增目的片断呢还是直接从总RNA上扩增目的cDNA 好一些？ 2.针对目的基因的特异性引物应该怎样设计？ 3.有没有试剂盒可以完成一部法的RT-PCR?如果有，哪一家公司的性价比高一些？ 4.关于总RNA的提取，网上说的Trizol法是手提呢还是试剂盒操作？ 5.我看论坛上有人说所用试剂盒是合成第一链cDNA用的，有没有可以合成双链的？ 初次做这个，问题比较笨，还望大侠们不吝赐教。 |
回复此楼» 猜你喜欢
时间戳又变了
已经有16人回复
-
科研孤儿太难了
已经有9人回复
-
时间戳变了，能看出什么问题？
已经有23人回复
-
只有每年这种时候来逛逛小木虫
已经有22人回复
-
今天系统多次维护，明天很可能放榜！
已经有10人回复
-
放榜前的不淡定
已经有12人回复
-
言之凿凿，明天官网会通知放榜？
已经有16人回复
-
重要消息，中午系统在维护
已经有12人回复
-
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有20人回复
-
今天基金会出结果吗？20260819
已经有15人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
2楼2008-09-21 14:06:51
seahow
木虫 (著名写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 1691.1
- 红花: 1
- 帖子: 1778
- 在线: 65.2小时
- 虫号: 78970
- 注册: 2005-07-07
- 性别: GG
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
★ ★
司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 7-14 15:40
司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 7-14 15:40
|
1 都一样.但建议先用oligo或随机引物,然后再目的.这样RT product还可以干别的用;或者一旦目的片段引物设计不佳 还有更改的余地. 2 引物设计很多方法.不过重要的是你要理解目的基因的结构,那里是起始密码子,终止密码子;以及所用载体的结构, 牢记:读码框一定对好,呵呵! 3 同意楼上的,另外promega也行. 4 Trizol是一个专利产品, 做了优化,使提取更简单. 谈不上手提还是kit, trizol本身就是kit, 5 RT就是第一条联,. 你多目的片段来自PCR,模板是RT product. gooood lucky!!希望对你有帮助.呵呵 |
3楼2008-09-21 14:42:43
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
4楼2008-09-21 15:25:04
xuehu2008
铜虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 244.5
- 散金: 95
- 帖子: 487
- 在线: 100小时
- 虫号: 570440
- 注册: 2008-06-07
- 性别: GG
- 专业: 环境生物物理
5楼2008-09-21 22:16:24
xuehu2008
铜虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 244.5
- 散金: 95
- 帖子: 487
- 在线: 100小时
- 虫号: 570440
- 注册: 2008-06-07
- 性别: GG
- 专业: 环境生物物理
6楼2008-09-21 22:17:59
xuehu2008
铜虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 244.5
- 散金: 95
- 帖子: 487
- 在线: 100小时
- 虫号: 570440
- 注册: 2008-06-07
- 性别: GG
- 专业: 环境生物物理
| 对了，在http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/bl2seq/wblast2.cgi中，我把那39个碱基分别复制在Sequence1和Sequence2栏中，为什么比对的结果竟然是No significant similarity was found ，为什么呢？ |
7楼2008-09-21 22:28:42
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
8楼2008-09-21 23:17:59
xuehu2008
铜虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 244.5
- 散金: 95
- 帖子: 487
- 在线: 100小时
- 虫号: 570440
- 注册: 2008-06-07
- 性别: GG
- 专业: 环境生物物理
9楼2008-09-22 00:15:56
40