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五色茶

铜虫 (小有名气)

[交流] RNA实验耗材及试剂处理 已有7人参与

接触RNA实验时间比较短,想问一下大家,RNA实验操作有哪些需要注意的地方?
DEPC水我现在的配制方法是先将试剂瓶高温高压灭菌,加入0.1%的DEPC后高温高压灭菌,4度保存,一般在一周之内用完。
实验用的其他试剂也是高温高压灭菌过的,离心管用的NESTRNAse free 的包装,但是仍然有RNA降解的现象出现,请问大家还有哪些地方可以改进的?
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一寸光阴一寸金,寸金难买寸光阴
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陈爱中

新虫 (小有名气)


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从来没用过depc水也没用过depc处理器材,只有EP管是买的axygen的,一直很好。

做实验的时候少说话别喷那么多唾沫,也别叫别人在傍边说话。
2楼2015-12-08 15:51:52
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jianguochen

新虫 (小有名气)


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引用回帖:
9楼: Originally posted by 五色茶 at 2015-12-09 08:54:15
那DEPC水怎么用啊?...

我认为楼主对DEPC的用法没什么不妥,DEPC消除了水中的RNase活性之后,在高压灭菌时分解成二氧化碳和乙醇并挥发。否则残留的DEPC会干扰后续的实验。当然,高压灭菌之后可以分成小包装,便于保存。
10楼2015-12-09 09:08:15
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xushiqi001

新虫 (小有名气)


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所有RNA实验的移液器必须专用,用带滤芯的吸头,不要使用退头器,用手拔掉吸头,在超净台操作。

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3楼2015-12-08 22:20:28
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xufengnbu

木虫 (小有名气)


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楼主,depc水不是这么用的。高压灭菌后它就失效了。那玩意有毒,使用时注意安全

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why is the way to success
4楼2015-12-08 23:27:45
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xufengnbu

木虫 (小有名气)


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枪头用0.1的depc水泡过夜。然后装盒,包好,灭菌烘干使用。depc直接加到灭菌水里配制0.1%浓度。

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why is the way to success
5楼2015-12-08 23:31:38
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13655322301

新虫 (初入文坛)


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将要用的玻璃仪器用depc水浸泡过夜,用玻璃瓶装去离子水,高温高压灭菌(在这个过程中,depc会分解失去毒性),然后在超净工作台上将depc加入到无菌水中备用。

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6楼2015-12-09 08:48:58
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五色茶

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 陈爱中 at 2015-12-08 15:51:52
从来没用过depc水也没用过depc处理器材,只有EP管是买的axygen的,一直很好。

做实验的时候少说话别喷那么多唾沫,也别叫别人在傍边说话。

EP管我也是用的axygen 的,在超净工作台里打开了很多次,不知道需要需要重新处理~
一寸光阴一寸金,寸金难买寸光阴
7楼2015-12-09 08:51:25
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五色茶

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xushiqi001 at 2015-12-08 22:20:28
所有RNA实验的移液器必须专用,用带滤芯的吸头,不要使用退头器,用手拔掉吸头,在超净台操作。

移液枪是在超净工作台里专用的,吸头用的axygen盒装的,现在盒装的快用完了,只有axygen袋装的了,所以在纠结要不要泡DEPC水处理一下。
一寸光阴一寸金,寸金难买寸光阴
8楼2015-12-09 08:53:39
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五色茶

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xufengnbu at 2015-12-08 23:27:45
楼主,depc水不是这么用的。高压灭菌后它就失效了。那玩意有毒,使用时注意安全

那DEPC水怎么用啊?
一寸光阴一寸金,寸金难买寸光阴
9楼2015-12-09 08:54:15
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