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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » RNA实验耗材及试剂处理
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五色茶

铜虫 (小有名气)

[交流] RNA实验耗材及试剂处理 已有7人参与

接触RNA实验时间比较短，想问一下大家，RNA实验操作有哪些需要注意的地方？
DEPC水我现在的配制方法是先将试剂瓶高温高压灭菌，加入0.1%的DEPC后高温高压灭菌，4度保存，一般在一周之内用完。
实验用的其他试剂也是高温高压灭菌过的，离心管用的NESTRNAse free 的包装，但是仍然有RNA降解的现象出现，请问大家还有哪些地方可以改进的？
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一寸光阴一寸金，寸金难买寸光阴
1楼 2015-12-08 15:22:15
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陈爱中

新虫 (小有名气)
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从来没用过depc水也没用过depc处理器材，只有EP管是买的axygen的，一直很好。

做实验的时候少说话别喷那么多唾沫，也别叫别人在傍边说话。
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2楼2015-12-08 15:51:52
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jianguochen

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by 五色茶 at 2015-12-09 08:54:15
那DEPC水怎么用啊？...

我认为楼主对DEPC的用法没什么不妥，DEPC消除了水中的RNase活性之后，在高压灭菌时分解成二氧化碳和乙醇并挥发。否则残留的DEPC会干扰后续的实验。当然，高压灭菌之后可以分成小包装，便于保存。
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10楼2015-12-09 09:08:15
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普通回帖

xushiqi001

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
所有RNA实验的移液器必须专用，用带滤芯的吸头，不要使用退头器，用手拔掉吸头，在超净台操作。

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3楼2015-12-08 22:20:28
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xufengnbu

木虫 (小有名气)
★
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楼主，depc水不是这么用的。高压灭菌后它就失效了。那玩意有毒，使用时注意安全

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why is the way to success
4楼2015-12-08 23:27:45
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xufengnbu

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
枪头用0.1的depc水泡过夜。然后装盒，包好，灭菌烘干使用。depc直接加到灭菌水里配制0.1%浓度。

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why is the way to success
5楼2015-12-08 23:31:38
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13655322301

新虫 (初入文坛)
★
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将要用的玻璃仪器用depc水浸泡过夜，用玻璃瓶装去离子水，高温高压灭菌（在这个过程中，depc会分解失去毒性），然后在超净工作台上将depc加入到无菌水中备用。

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6楼2015-12-09 08:48:58
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五色茶

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 陈爱中 at 2015-12-08 15:51:52
从来没用过depc水也没用过depc处理器材，只有EP管是买的axygen的，一直很好。

做实验的时候少说话别喷那么多唾沫，也别叫别人在傍边说话。

EP管我也是用的axygen 的，在超净工作台里打开了很多次，不知道需要需要重新处理~
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一寸光阴一寸金，寸金难买寸光阴
7楼2015-12-09 08:51:25
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五色茶

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xushiqi001 at 2015-12-08 22:20:28
所有RNA实验的移液器必须专用，用带滤芯的吸头，不要使用退头器，用手拔掉吸头，在超净台操作。

移液枪是在超净工作台里专用的，吸头用的axygen盒装的，现在盒装的快用完了，只有axygen袋装的了，所以在纠结要不要泡DEPC水处理一下。
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一寸光阴一寸金，寸金难买寸光阴
8楼2015-12-09 08:53:39
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五色茶

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xufengnbu at 2015-12-08 23:27:45
楼主，depc水不是这么用的。高压灭菌后它就失效了。那玩意有毒，使用时注意安全

那DEPC水怎么用啊？
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一寸光阴一寸金，寸金难买寸光阴
9楼2015-12-09 08:54:15
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