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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 超螺旋质粒DNA体外切割凝胶电泳
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荼蘼花事

新虫 (小有名气)

[交流] 超螺旋质粒DNA体外切割凝胶电泳

最近在做PUC19质粒的体外切割试验（自己合成的物质），但是在凝胶电泳中出现一些问题，望各位不吝赐教。
1. 图片中,C 和1都为只加了PUC19和缓冲的条带，为何跑出两条亮度相近的条带？是否表示购买的质粒DNA质量不佳，本身就存在多种构型？
2. 条带4,5 为PUC19中加入较高浓度合成的物质，为何跑出来的电泳图未见条带？多次试验都是如此，不解。
3. 条带7为何出现4条带？！
4. 是否带8跑出的三条带才是PUC19的三种形态？那么C、1、2、3、6、7跑的较慢的条带对应什么物质呢？
初次涉及质粒DNA凝胶电泳，又苦于身边没有人做相关方面，望虫友们解惑

超螺旋质粒DNA体外切割凝胶电泳
2.jpg
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时光，浓淡相宜；人心，远近相安。
1楼 2015-12-04 20:54:29
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westshine

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
亲，我不是搞生物的！

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2楼2015-12-04 22:28:17
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荼蘼花事

新虫 (小有名气)
自己顶，求各位指点呀
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时光，浓淡相宜；人心，远近相安。
3楼2015-12-05 08:11:12
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upgo123

金虫 (小有名气)
你是单酶切吗

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选择，然后坚持
4楼2015-12-05 09:02:50
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AliTheFox

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
为什么不加maker？这样又看不出什么的。

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5楼2015-12-05 09:35:30
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荼蘼花事

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by upgo123 at 2015-12-05 09:02:50
你是单酶切吗

我不是酶切的 利用的是配合物的化学核酸酶活性
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时光，浓淡相宜；人心，远近相安。
6楼2015-12-05 14:08:24
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荼蘼花事

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by AliTheFox at 2015-12-05 09:35:30
为什么不加maker？这样又看不出什么的。

一定需要加marker吗？因为看相关文献都只是会出现三条质粒DNA的不同形态
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时光，浓淡相宜；人心，远近相安。
7楼2015-12-05 14:09:18
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stl409
8楼2015-12-05 14:26:46
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纳米之心

木虫 (文坛精英)
祝福楼主
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火星人要回火星了！！！
9楼2015-12-05 14:43:18
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dadhz

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
给个笨建议，把出现的条带分别回收，用特异性引物对每个条带正向和反向测序，这样应该能找出酶切位点，知道了酶切位点，再看每个酶切片段，岂不是一目了然
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10楼2015-12-06 11:05:19
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