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荼蘼花事

新虫 (小有名气)

[交流] 超螺旋质粒DNA体外切割凝胶电泳

最近在做PUC19质粒的体外切割试验(自己合成的物质),但是在凝胶电泳中出现一些问题,望各位不吝赐教。
1. 图片中,C 和1都为只加了PUC19和缓冲的条带,为何跑出两条亮度相近的条带?是否表示购买的质粒DNA质量不佳,本身就存在多种构型?
2. 条带4,5 为PUC19中加入较高浓度合成的物质,为何跑出来的电泳图未见条带?多次试验都是如此,不解。
3. 条带7为何出现4条带?!
4. 是否带8跑出的三条带才是PUC19的三种形态?那么C、1、2、3、6、7跑的较慢的条带对应什么物质呢?
初次涉及质粒DNA凝胶电泳,又苦于身边没有人做相关方面,望虫友们解惑

超螺旋质粒DNA体外切割凝胶电泳
2.jpg
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westshine

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
亲,我不是搞生物的!

发自小木虫Android客户端
2楼2015-12-04 22:28:17
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荼蘼花事

新虫 (小有名气)

自己顶,求各位指点呀
时光,浓淡相宜;人心,远近相安。
3楼2015-12-05 08:11:12
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upgo123

金虫 (小有名气)

选择,然后坚持
4楼2015-12-05 09:02:50
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AliTheFox

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
为什么不加maker?这样又看不出什么的。

发自小木虫Android客户端
5楼2015-12-05 09:35:30
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荼蘼花事

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by upgo123 at 2015-12-05 09:02:50
你是单酶切吗

我不是酶切的 利用的是配合物的化学核酸酶活性
时光,浓淡相宜;人心,远近相安。
6楼2015-12-05 14:08:24
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荼蘼花事

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by AliTheFox at 2015-12-05 09:35:30
为什么不加maker?这样又看不出什么的。

一定需要加marker吗?因为看相关文献都只是会出现三条质粒DNA的不同形态
时光,浓淡相宜;人心,远近相安。
7楼2015-12-05 14:09:18
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8楼2015-12-05 14:26:46
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纳米之心

木虫 (文坛精英)

祝福楼主
火星人要回火星了!!!
9楼2015-12-05 14:43:18
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dadhz

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
给个笨建议,把出现的条带分别回收,用特异性引物对每个条带正向和反向测序,这样应该能找出酶切位点,知道了酶切位点,再看每个酶切片段,岂不是一目了然
10楼2015-12-06 11:05:19
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