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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白质——非还原型电泳，包涵体复性
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lxl1213

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质——非还原型电泳，包涵体复性 已有1人参与

包涵体复性遇到许多问题，首先是非还原型电泳，电泳条带为什么老是中间有个洞啊，如图片所示，同一个样品，第一条道是还原型的，第二条道是非还原型的，为什么会这样。
然后第二个问题，包涵体蛋白复性，我的包涵体溶解液为8M尿素，100mM磷酸二氢钠，10mM Tris-cl，pH 8.5,基础复性液是50mM Tris-cl，2mM EDTA, pH 8.5，问题来了，我把包涵体溶液一滴入复性液中就会出现沉淀，而直接滴入蒸馏水中反而没有什么沉淀，是什么问题呢？

蛋白质——非还原型电泳，包涵体复性
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1楼 2015-12-03 12:07:43
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总有二狗咬朕

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

出现蛋白析出，肯定是条件变化太剧烈了。
复性应该采取复性液浓度和PH值逐渐变化的方法，例如根据包涵体的溶液成分，每隔1个PH或浓度值配置一种溶液，逐步透析到正常。此外透析时必须浓度极低，条件温和，使蛋白质能够正确折叠。但是复性的比率应该很低。
若加变性剂尿素可加到2M，盐酸胍可加到1-1.5M；
另外可将甘油浓度增加，范围可在≤30%，且在复性样品中也可加适量甘油。给你推荐个文章感觉两篇差不多都可以看看包涵体复性常见问题和蛋白质复性常见问题
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我好累，承受这个年纪不该有的帅！
2楼2016-01-14 11:34:08
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dushangyun

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 总有二狗咬朕 at 2016-01-14 11:34:08
出现蛋白析出，肯定是条件变化太剧烈了。
复性应该采取复性液浓度和PH值逐渐变化的方法，例如根据包涵体的溶液成分，每隔1个PH或浓度值配置一种溶液，逐步透析到正常。此外透析时必须浓度极低，条件温和，使蛋白质 ...

大师，可以把文章给我转发一下吗？
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经不住逝水流年，逃不过此间少年
3楼2016-06-27 09:28:51
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