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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于甘油冷冻保存菌种 大家是怎么做的？
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纳样飘发

金虫 (小有名气)

[交流] 关于甘油冷冻保存菌种 大家是怎么做的？

我大概查了一下 目前在甘油冷冻离心貌似没有一个标准的做法？我查到的情况如下
（1）甘油浓度：在10%-80%的都有
（2）菌的形式
①以前跟我们实验室合作的一个工程师教给我们的做法是把纯菌划斜面，菌长好后直接把灭菌20%甘油2mL倒在试管里，用接菌环把菌刮到甘油里，把甘油倒在甘油管里。
②隔壁实验室的做法是菌种液体培养，将液体培养菌液离心，去掉液体，留下沉淀，加入新培养基再加入同体积的50%甘油，重悬，倒在甘油管里。
③还了解到一种做法是液体培养的培养液直接加入同体积甘油，然后混匀倒在甘油管里。
（3）保存
有的说直接放在-80℃冰箱里；有的说先放到-20℃冰箱预冷，再转移到-80℃冰箱里；还有的说只在-20℃冰箱里保存即可。
（4）保存时间
有的说2-4个月、有的说一两年、有的说十年。。
（5）菌种活化
甘油管保存的菌种活化使用，有的说在37℃水浴快速解冻然后接培养液；有的说要在冰块上缓慢解冻然后接培养液。

那么请问大家 大家都是怎么操作的、、甘油管冷冻保存有标准操作规范么？

我觉得操作上分歧这么大说明这些中方法都是可以的。。。。
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1楼 2015-12-02 18:13:25
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小不了强

新虫 (小有名气)
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纳样飘发: 金币+2 2015-12-03 09:24:58
我们实验室都是这样做的，LZ可自行采纳:
（1）配置50%甘油，121摄氏度高压灭菌20min，4摄氏度冻存待用
（2）菌液生长浓度达到一定OD值即可进行保存
（3）850ul菌液+150ul灭菌甘油
（4）一般保存在—20摄氏度即可，一年左右
（5）菌体活化:建议缓慢冻融（常温放置或自来水中放置）后再取1%接种量接种到培养基中。

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5楼2015-12-02 23:37:18
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上官尹悠

金虫 (职业作家)
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纳样飘发: 金币+1 2015-12-03 09:24:45
我们实验室是甘油最终浓度是25%  直接冻-30  没那么严格吧

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努力，追求自己的追求！
6楼2015-12-02 23:40:50
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030Selma

金虫 (正式写手)
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纳样飘发: 金币+1 2015-12-09 14:36:23
50%甘油，高压灭菌，之后与菌液1:1混匀后，存于-80,两年左右没有任何问题，时间久了之后如果怕菌失活的话，可以重复复活一下，再用甘油保存回去
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10楼2015-12-03 22:00:26
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纳样飘发

金虫 (小有名气)
定

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2楼2015-12-02 22:16:10
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SorryJ

银虫 (小有名气)
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纳样飘发: 金币+1 2015-12-03 09:25:12
我们实验室是30%已灭菌的甘油，跟菌液1：1混合，液氮速冻后，-80°保存。以前我用过隔壁实验室的60%的甘油，混合比例改一下就可以了。

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3楼2015-12-02 23:24:02
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看见自己

铁杆木虫 (知名作家)
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纳样飘发: 金币+1 2015-12-03 09:25:06
菌液与20%甘油等比例混合，零下20度保存一年没问题。

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4楼2015-12-02 23:31:15
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明刃

铁杆木虫 (小有名气)
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纳样飘发: 金币+2 2015-12-03 17:42:22
我当时做大肠杆菌的冷冻甘油保存：
   保存时有两种方法：1 取对数期的菌液，加入50%的灭过菌的甘油溶液，至甘油终浓度为10%--25%；2 先用新鲜培养基稀释灭过菌的50%的甘油溶液，至甘油浓度为10--25%，然后直接把平板上长的菌落挑起来，重悬到保存液中。
然后直接放到-80度冰箱，一般保存一年左右吧。
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7楼2015-12-03 14:52:32
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1179596912

新虫 (小有名气)
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纳样飘发: 金币+2 2015-12-03 20:35:24
我们一直是按第三种方法做的

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8楼2015-12-03 18:55:21
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纳样飘发

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 1179596912 at 2015-12-03 18:55:21
我们一直是按第三种方法做的

我也打算按第三种方法做了。。。哈哈哈

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青岛明月海藻集团，海藻酸盐、海藻酸丙二醇酯PGA.微信：BMSG_Tienjen
9楼2015-12-03 20:35:15
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