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bingwendao铁虫 (初入文坛)
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[求助]
碰到一个让人无语的QPCR问题，求大神帮助！！！！ 已有1人参与
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模板是chip抓下来的DNA，QPCR之前用普通PCR扩过（用的是荧光定量PCR SYBRGREEN 的试剂，所以后来上QPCR的机子条件都是没有变得），有条带而且清晰。但是上了荧光定量PCR后，扩增曲线是直线，一点峰都没起。用排除法找原因，用试剂扩增了cDNA的GAPDH，起峰了，证明机器和试剂都没问题。然后为了排除是引物的关系，重新稀释了新的引物（10μM），用普通PCR扩增了四个管子：1，旧引物+模板DNA；2，旧引物+实验室随机取的DNA；3，新引物+模板DNA；4，新引物+实验室随机取的DNA；结果四个管子都扩增出条带，而且清晰。于是做了两个QPCR孔：1，新引物+模板DNA；2，新引物+实验室随机取的DNA；结果QPCR两个管子都没有起峰，直线的啥都没有！！！！ 本人已疯边缘！！！！求大神帮助啊！！！！！ |
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