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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 碰到一个让人无语的QPCR问题，求大神帮助！！！！
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bingwendao

铁虫 (初入文坛)

[求助] 碰到一个让人无语的QPCR问题，求大神帮助！！！！ 已有1人参与

模板是chip抓下来的DNA，QPCR之前用普通PCR扩过（用的是荧光定量PCR SYBRGREEN 的试剂，所以后来上QPCR的机子条件都是没有变得），有条带而且清晰。但是上了荧光定量PCR后，扩增曲线是直线，一点峰都没起。用排除法找原因，用试剂扩增了cDNA的GAPDH，起峰了，证明机器和试剂都没问题。然后为了排除是引物的关系，重新稀释了新的引物（10μM），用普通PCR扩增了四个管子：1，旧引物+模板DNA；2，旧引物+实验室随机取的DNA；3，新引物+模板DNA；4，新引物+实验室随机取的DNA；结果四个管子都扩增出条带，而且清晰。于是做了两个QPCR孔：1，新引物+模板DNA；2，新引物+实验室随机取的DNA；结果QPCR两个管子都没有起峰，直线的啥都没有！！！！

本人已疯边缘！！！！求大神帮助啊！！！！！
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科研为的是应用实践服务社会
1楼 2015-12-01 11:42:46
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yjqhades

禁虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
2楼2015-12-01 15:10:44
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程yuxin

新虫 (初入文坛)
请问楼主问题解决了没？我也遇到了这样的问题会不会是酶和引物不匹配啊

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3楼2017-05-22 09:26:41
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