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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC用双波长同时检测梓醇与绿原酸
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林夕雨露

新虫 (初入文坛)

[求助] HPLC用双波长同时检测梓醇与绿原酸 已有2人参与

如第一张图所示，是混合标准品，8点几那个是梓醇，29点几那个是绿原酸，分别是210nm和324nm,
采用梯度洗脱：0-13min,乙腈：0.1%磷酸（1:99）
                       13-20min乙腈：0.1%磷酸（10:99）
                       20-35min乙腈：0.1%磷酸（10:99）
结果绿原酸出峰挺好的，但梓醇就出现图中的情况，进了好几针了，一直这样，请问这是什么原因，是分解了吗，我设的梯度是不是也有问题？？急求啊，大恩不言谢！！！

PS：看过光谱图好像没有被污染，而且奇怪的是单进了一针梓醇，峰是完整的，不像上图那样，只是峰型不佳，如第二张图

HPLC用双波长同时检测梓醇与绿原酸
IMAG2925.jpg


HPLC用双波长同时检测梓醇与绿原酸-1
1780801772.jpg
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1楼 2015-11-30 21:20:41
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学术巨星

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第一个图第一个峰是由于溶液中绿原酸的存在对梓醇的洗脱产生的不利影响，如果二者必须同时测定这种影响很难消除。
只有单独测定才会达到图二的效果，但图二洗脱强度不够，导致梓醇峰形不好，可以在图二梓醇出峰之前适当提高有机相比例，改善洗脱。
仅供参考。
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2楼2015-11-30 22:10:30
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学术巨星

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by 学术巨星 at 2015-11-30 22:10:30
第一个图第一个峰是由于溶液中绿原酸的存在对梓醇的洗脱产生的不利影响，如果二者必须同时测定这种影响很难消除。
只有单独测定才会达到图二的效果，但图二洗脱强度不够，导致梓醇峰形不好，可以在图二梓醇出峰之前 ...

如果柱子耐受允许，也可适当增加酸浓度。
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3楼2015-11-30 22:14:11
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林夕雨露

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 学术巨星 at 2015-11-30 22:10:30
第一个图第一个峰是由于溶液中绿原酸的存在对梓醇的洗脱产生的不利影响，如果二者必须同时测定这种影响很难消除。
只有单独测定才会达到图二的效果，但图二洗脱强度不够，导致梓醇峰形不好，可以在图二梓醇出峰之前 ...

那就是这两个不太能同时测是吗？改梯度和流动相比例能行吗？

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4楼2015-12-01 14:33:37
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学术巨星

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 林夕雨露 at 2015-12-01 14:33:37
那就是这两个不太能同时测是吗？改梯度和流动相比例能行吗？
...

实际动手试试看吧
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5楼2015-12-01 14:43:56
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林夕雨露

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 学术巨星 at 2015-12-01 14:43:56
实际动手试试看吧...

好的谢谢

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6楼2015-12-01 14:50:17
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林夕雨露

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 学术巨星 at 2015-12-01 14:43:56
实际动手试试看吧...

我以前用流动相单独配梓醇时好像峰行没有这么糟，蛮好的，但现在母液是用甲醇配的，然后和绿混合后再用流动相溶解的，结果如图一，你说用甲醇配和流动相配有很大差别吗？还有这和柱子是不是有关系？

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7楼2015-12-01 15:04:05
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学术巨星

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 林夕雨露 at 2015-12-01 15:04:05
我以前用流动相单独配梓醇时好像峰行没有这么糟，蛮好的，但现在母液是用甲醇配的，然后和绿混合后再用流动相溶解的，结果如图一，你说用甲醇配和流动相配有很大差别吗？还有这和柱子是不是有关系？
...

确定好分析条件以后，最好是用初始流动相配制样品，否则有的会有影响
与柱子也有关系，流动相也有影响。
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8楼2015-12-01 15:09:13
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zhz1285

铁虫 (初入文坛)
主要是柱子原因，建议用适合极性样品柱子

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没个性，签什么名
9楼2015-12-01 15:33:32
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yan1984

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
高水相，色谱柱坏的会比较快，需注意。
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10楼2015-12-01 17:11:52
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