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蓝白斑筛选个别个别白斑均不是阳性克隆。阳性克隆再插入一个片段如何筛选 已有1人参与
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1.最近在做质粒重组，6800bp质粒插入2000bp的片段，连接后蓝白斑筛选，可是几乎全是蓝斑而且长得很密，偶尔几颗白斑也均不是阳性克隆，请问如何解决？酶切验证没有问题，连接酶也没有问题，具体连接效率如何判断？ 2.如果我已经在质粒上加入了一个片段，经蓝白斑筛选后挑出了阳性克隆，然后我又要在这个重组质粒上插入另一个片段，此时我如何筛选？ 求各位帮助，蓝白斑筛选了2个月了没有阳性克隆，这么简单的实验出问题很忧伤。。 P：6800bp的质粒双酶切，2000bp的片段是从另一个DNA上扩增出来的，引物含酶切位点。 |
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unclefred
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2楼2015-11-28 07:57:31
3楼2015-11-30 09:45:28
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建议你看看基于T4 DNA Polymerase的克隆，可以一次性克隆几个片段进一个载体。还有，建议你不要死盯着蓝白斑筛选，这个对于克隆来说不是必须的。做好对照，转化子直接用菌落PCR验证。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2015-12-01 07:53:51
5楼2015-12-01 12:25:03