应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 蓝白斑筛选个别个别白斑均不是阳性克隆。阳性克隆再插入一个片段如何筛选
51/1返回列表
查看: 1632  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Joyceyuan

新虫 (初入文坛)

[求助] 蓝白斑筛选个别个别白斑均不是阳性克隆。阳性克隆再插入一个片段如何筛选 已有1人参与

1.最近在做质粒重组，6800bp质粒插入2000bp的片段，连接后蓝白斑筛选，可是几乎全是蓝斑而且长得很密，偶尔几颗白斑也均不是阳性克隆，请问如何解决？酶切验证没有问题，连接酶也没有问题，具体连接效率如何判断？
    2.如果我已经在质粒上加入了一个片段，经蓝白斑筛选后挑出了阳性克隆，然后我又要在这个重组质粒上插入另一个片段，此时我如何筛选？
求各位帮助，蓝白斑筛选了2个月了没有阳性克隆，这么简单的实验出问题很忧伤。。
P：6800bp的质粒双酶切，2000bp的片段是从另一个DNA上扩增出来的，引物含酶切位点。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-11-27 22:09:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

unclefred

金虫 (初入文坛)
好好看一下蓝白斑筛选的原理，没有人说插入后一定是白斑。蓝斑也可能是阳性的。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2015-11-28 07:57:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Joyceyuan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by unclefred at 2015-11-28 07:57:31
好好看一下蓝白斑筛选的原理，没有人说插入后一定是白斑。蓝斑也可能是阳性的。

蓝斑和白斑我都挑过克隆，全部是阴性的。。。
赞一下 回复此楼
3楼2015-11-30 09:45:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

unclefred

金虫 (初入文坛)
建议你看看基于T4 DNA Polymerase的克隆，可以一次性克隆几个片段进一个载体。还有，建议你不要死盯着蓝白斑筛选，这个对于克隆来说不是必须的。做好对照，转化子直接用菌落PCR验证。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2015-12-01 07:53:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyulin

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
Joyceyuan: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-12-01 14:52:14
第二个问题是没有筛选标记的情况下，调节好载体和外源片段比例，减少载体用量，用效率高的感受态
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2015-12-01 12:25:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Joyceyuan 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 19:18 by q1p9ixelzp
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 18:58 by q1p9ixelzp
[公派出国] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 18:00 by q1p9ixelzp
[考研] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 4/200 2026-06-21 17:45 by q1p9ixelzp
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 17:40 by q1p9ixelzp
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 17:37 by q1p9ixelzp
[公派出国] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 4/200 2026-06-21 17:25 by ky8v3skvft
[考博] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 5/250 2026-06-21 17:20 by ky8v3skvft
[博后之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 6/300 2026-06-21 17:05 by ky8v3skvft
[公派出国] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 5/250 2026-06-21 17:00 by ky8v3skvft
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +5 vlfdw50o0u 2026-06-20 7/350 2026-06-21 16:57 by ky8v3skvft
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 vlfdw50o0u 2026-06-20 5/250 2026-06-21 16:45 by ky8v3skvft
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 7/350 2026-06-21 16:40 by ky8v3skvft
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 9/450 2026-06-21 16:37 by ky8v3skvft
[基金申请] 青A35岁以下通知答辩了吗 +3 暨阳一只柴 2026-06-17 3/150 2026-06-21 09:39 by kudofaye
[考博] 【全奖博士/科研助理/博后招生】新加坡南洋理工大学机械与航空航天学院 +3 robohaha 2026-06-15 4/200 2026-06-21 00:36 by lanbing1
[硕博家园] 一篇论文同时出现在两个期刊，一模一样，这算不算学术不端，请各位老师斧正。 +11 mahl005 2026-06-14 12/600 2026-06-18 17:01 by 770904134
[基金申请] 希望面上有个好结果 +7 碧水00 2026-06-16 7/350 2026-06-18 12:18 by wuke100666
[论文投稿] 三区计算机方向期刊推荐 +5 1457340941 2026-06-15 5/250 2026-06-17 13:16 by 会议编辑
[论文投稿] sci论文二审求助 +5 潘倍倍 2026-06-15 5/250 2026-06-16 10:15 by xs74101122
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭