| 查看: 1689 | 回复: 4 | ||
[求助]
蓝白斑筛选个别个别白斑均不是阳性克隆。阳性克隆再插入一个片段如何筛选 已有1人参与
|
|
1.最近在做质粒重组，6800bp质粒插入2000bp的片段，连接后蓝白斑筛选，可是几乎全是蓝斑而且长得很密，偶尔几颗白斑也均不是阳性克隆，请问如何解决？酶切验证没有问题，连接酶也没有问题，具体连接效率如何判断？ 2.如果我已经在质粒上加入了一个片段，经蓝白斑筛选后挑出了阳性克隆，然后我又要在这个重组质粒上插入另一个片段，此时我如何筛选？ 求各位帮助，蓝白斑筛选了2个月了没有阳性克隆，这么简单的实验出问题很忧伤。。 P：6800bp的质粒双酶切，2000bp的片段是从另一个DNA上扩增出来的，引物含酶切位点。 |
回复此楼» 猜你喜欢
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有272人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
unclefred
金虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1320.5
- 帖子: 23
- 在线: 5.5小时
- 虫号: 979326
- 注册: 2010-03-23
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2015-11-28 07:57:31
3楼2015-11-30 09:45:28
unclefred
金虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1320.5
- 帖子: 23
- 在线: 5.5小时
- 虫号: 979326
- 注册: 2010-03-23
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
|
建议你看看基于T4 DNA Polymerase的克隆，可以一次性克隆几个片段进一个载体。还有，建议你不要死盯着蓝白斑筛选，这个对于克隆来说不是必须的。做好对照，转化子直接用菌落PCR验证。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2015-12-01 07:53:51
5楼2015-12-01 12:25:03