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星茹扬

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白酶切后出现聚集，怎么办 已有1人参与

纯化后的GST融合蛋白，酶切后，跑SDS-PAGE电泳，发现酶切后的蛋白条带在融合蛋白之上，可能是发生了聚集。本人是新手，理论不是很懂，请教各位大神是什么原因，应该怎么办？？

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1楼 2015-11-24 20:51:52
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
在SDS-PAGE胶上能保持聚合状态的不是很多见。。。有胶图么？
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2楼2015-11-25 10:57:52
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星茹扬

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a86052 at 2015-11-25 10:57:52
在SDS-PAGE胶上能保持聚合状态的不是很多见。。。有胶图么？

第一道是Mark，第二是酶切后的，第三是融合蛋白，第四是切下来的GST
蛋白酶切后出现聚集，怎么办



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3楼2015-11-25 19:31:52
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a86052

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 星茹扬 at 2015-11-25 19:31:52
第一道是Mark，第二是酶切后的，第三是融合蛋白，第四是切下来的GST

...

好大一坨融合蛋白和GST。你的蛋白分子量多少啊？用的什么酶酶切的？柱上切的？第二道是洗脱的蛋白？
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4楼2015-11-26 14:12:07
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星茹扬

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by a86052 at 2015-11-26 14:12:07
好大一坨融合蛋白和GST。你的蛋白分子量多少啊？用的什么酶酶切的？柱上切的？第二道是洗脱的蛋白？...

好大坨是因为我把它们加太多了，浓度太高…第二道是酶切后的，去除GST标签后的…凝血酶切的

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5楼2015-11-26 14:46:31
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 星茹扬 at 2015-11-26 14:46:31
好大坨是因为我把它们加太多了，浓度太高…第二道是酶切后的，去除GST标签后的…凝血酶切的
...

你可以把酶切后多的这条带去鉴定下，确认是不是你的蛋白
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6楼2015-11-26 15:20:02
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星茹扬

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by a86052 at 2015-11-26 15:20:02
你可以把酶切后多的这条带去鉴定下，确认是不是你的蛋白...

鉴定？质谱么？

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7楼2015-11-26 19:17:30
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a86052

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 星茹扬 at 2015-11-26 19:17:30
鉴定？质谱么？
...

可以呀，我觉得出现这种异常，还是鉴定下比较好
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8楼2015-11-27 08:34:46
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星茹扬

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by a86052 at 2015-11-27 08:34:46
可以呀，我觉得出现这种异常，还是鉴定下比较好...

可是要是只是聚集体，质谱是可以分开的，但是我做出来的东西还是聚集体啊，并不是我想要的单体…

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9楼2015-11-27 15:19:49
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