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星茹扬

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白酶切后出现聚集,怎么办 已有1人参与

纯化后的GST融合蛋白,酶切后,跑SDS-PAGE电泳,发现酶切后的蛋白条带在融合蛋白之上,可能是发生了聚集。本人是新手,理论不是很懂,请教各位大神是什么原因,应该怎么办??

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a86052

金虫 (正式写手)

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感谢参与,应助指数 +1
在SDS-PAGE胶上能保持聚合状态的不是很多见。。。有胶图么?
2楼2015-11-25 10:57:52
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星茹扬

新虫 (初入文坛)

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2楼: Originally posted by a86052 at 2015-11-25 10:57:52
在SDS-PAGE胶上能保持聚合状态的不是很多见。。。有胶图么?

第一道是Mark,第二是酶切后的,第三是融合蛋白,第四是切下来的GST
蛋白酶切后出现聚集,怎么办



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3楼2015-11-25 19:31:52
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a86052

金虫 (正式写手)

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3楼: Originally posted by 星茹扬 at 2015-11-25 19:31:52
第一道是Mark,第二是酶切后的,第三是融合蛋白,第四是切下来的GST

...

好大一坨融合蛋白和GST。你的蛋白分子量多少啊?用的什么酶酶切的?柱上切的?第二道是洗脱的蛋白?
4楼2015-11-26 14:12:07
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星茹扬

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4楼: Originally posted by a86052 at 2015-11-26 14:12:07
好大一坨融合蛋白和GST。你的蛋白分子量多少啊?用的什么酶酶切的?柱上切的?第二道是洗脱的蛋白?...

好大坨是因为我把它们加太多了,浓度太高…第二道是酶切后的,去除GST标签后的…凝血酶切的

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5楼2015-11-26 14:46:31
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a86052

金虫 (正式写手)

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5楼: Originally posted by 星茹扬 at 2015-11-26 14:46:31
好大坨是因为我把它们加太多了,浓度太高…第二道是酶切后的,去除GST标签后的…凝血酶切的
...

你可以把酶切后多的这条带去鉴定下,确认是不是你的蛋白
6楼2015-11-26 15:20:02
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星茹扬

新虫 (初入文坛)

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6楼: Originally posted by a86052 at 2015-11-26 15:20:02
你可以把酶切后多的这条带去鉴定下,确认是不是你的蛋白...

鉴定?质谱么?

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7楼2015-11-26 19:17:30
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a86052

金虫 (正式写手)

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7楼: Originally posted by 星茹扬 at 2015-11-26 19:17:30
鉴定?质谱么?
...

可以呀,我觉得出现这种异常,还是鉴定下比较好
8楼2015-11-27 08:34:46
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星茹扬

新虫 (初入文坛)

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8楼: Originally posted by a86052 at 2015-11-27 08:34:46
可以呀,我觉得出现这种异常,还是鉴定下比较好...

可是要是只是聚集体,质谱是可以分开的,但是我做出来的东西还是聚集体啊,并不是我想要的单体…

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9楼2015-11-27 15:19:49
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