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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 光谱分析 » 荧光分光光度计使用的一些问题
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音轨

铜虫 (著名写手)

[求助] 荧光分光光度计使用的一些问题 已有3人参与

我扫的是硫化镉，按理来说应该有荧光吸收的，但是不太会操作，好像没扫出有用的图。
1.我去查了下分析化学书，书上有这么一段话是说拉曼光会对待测物荧光吸收有干扰，通过扫空白溶液找到合适的激发光波长。不太懂什么意思。
 http://\"荧光分光光度计使用的一些问题\"
 http://\"荧光分光光度计使用的一些问题-1\"
2.我扫的是发射图谱（激发波长固定），之前隔壁老师告诉我待测物的紫外最大吸收波长（待测物紫外最大吸收波长在233~235nm）不一定与它最合适的发射波长相符，有些物质没有紫外吸收但是有荧光吸收，按理说硫化镉是有光致发光特性的，应该扫得出来峰啊......
师哥告诉我设定的时候“发射终止波长”不要超过“激发波长”的2倍，还有“激发波长”应比“发射起始波长小”10~20nm，后一个无非是不想看到激发波长那个尖锐的峰我觉得这个无所谓，前一个我不知道这么设置有什么必要。
 http://\"荧光分光光度计使用的一些问题-2\"
3.这是激发波长为250nm时候得到的图谱，由于发射终止波长设定在480nm，所以只看到一个上升趋势，我觉得它应该是个峰吧。
 http://\"荧光分光光度计使用的一些问题-3\"
我也闹不清楚到底怎么才能正确的扫出来荧光吸收峰......求万能的虫友指点一二。
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1楼 2015-11-23 11:13:04
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学术巨星

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 音轨 at 2015-11-23 21:48:33
上海产的，F97PRO，说明书上得不到什么有用的信息。3D荧光光谱我不知道这台机器能不能扫，因为说明书里没包含你说的3D荧光光谱。老板不管，师哥（不是亲的）不会，实在不行不扫了。。。发论文少个表征也没什么。...

那我觉得你还是好好看看仪器的说明书，看看激发 发射的设定要求。可以先设定个低波长的激发，然后扫发射光谱。然后激发波长递增，再继续扫发射光谱。之后大概能得到一个最佳发射波长，在这个发射波长下，再反过来验证激发波长。

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音轨
7楼2015-11-23 22:13:42
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学术巨星

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不知道你用的什么仪器，要确定最佳激发和发射光谱，可以扫3D荧光光谱，有的仪器要求发射波长比激发波长大20nm，我用过瓦里安的荧光，它在设置3D荧光扫描时，没有激发和发射波长的设定限制，二者可以相等。得到3D光谱后，就可清晰看到最佳ex和em了。

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3楼2015-11-23 12:21:30
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音轨

铜虫 (著名写手)
什么鬼，图片为什么裂了。。
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2楼2015-11-23 11:13:46
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铜虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 学术巨星 at 2015-11-23 12:21:30
不知道你用的什么仪器，要确定最佳激发和发射光谱，可以扫3D荧光光谱，有的仪器要求发射波长比激发波长大20nm，我用过瓦里安的荧光，它在设置3D荧光扫描时，没有激发和发射波长的设定限制，二者可以相等。得到3D光谱 ...

上海产的，F97PRO，说明书上得不到什么有用的信息。3D荧光光谱我不知道这台机器能不能扫，因为说明书里没包含你说的3D荧光光谱。老板不管，师哥（不是亲的）不会，实在不行不扫了。。。发论文少个表征也没什么。
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4楼2015-11-23 21:48:33
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音轨

铜虫 (著名写手)
每次发帖求助都没人理，是金币太少了么......好凄凉，现实中的人帮不了忙，网络求助也不好使。
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5楼2015-11-23 21:50:50
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01102

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你会正扫和反扫？正扫是扫最大发射，反扫是扫最大激发，激发发射对上就可以了，（怎么正扫反扫就别问我啦，打字来累）
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音轨
6楼2015-11-23 21:57:01
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铜虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 学术巨星 at 2015-11-23 22:13:42
那我觉得你还是好好看看仪器的说明书，看看激发 发射的设定要求。可以先设定个低波长的激发，然后扫发射光谱。然后激发波长递增，再继续扫发射光谱。之后大概能得到一个最佳发射波长，在这个发射波长下，再反过来验 ...

我上次就是这么扫的可是并扫不出来，溶剂用的甲醇，应该不是溶剂的事，是不是跟发射终止波长设得太短有关系？我明天再去试试吧，总之，谢谢你。

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8楼2015-11-23 22:35:57
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铜虫 (著名写手)
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7楼: Originally posted by 学术巨星 at 2015-11-23 22:13:42
那我觉得你还是好好看看仪器的说明书，看看激发 发射的设定要求。可以先设定个低波长的激发，然后扫发射光谱。然后激发波长递增，再继续扫发射光谱。之后大概能得到一个最佳发射波长，在这个发射波长下，再反过来验 ...

说明书上没写激发波长和发射起始波长谁需要比谁大的问题，我之前看过了。

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9楼2015-11-23 22:36:52
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铜虫 (著名写手)
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6楼: Originally posted by 01102 at 2015-11-23 21:57:01
你会正扫和反扫？正扫是扫最大发射，反扫是扫最大激发，激发发射对上就可以了，（怎么正扫反扫就别问我啦，打字来累）

会的，现在问题是扫发射光谱最大吸收峰出不来。。如果出来了我就不发这贴问了。

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10楼2015-11-23 22:38:47
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