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音轨铜虫 (著名写手)
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[求助]
荧光分光光度计使用的一些问题 已有3人参与
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我扫的是硫化镉，按理来说应该有荧光吸收的，但是不太会操作，好像没扫出有用的图。 1.我去查了下分析化学书，书上有这么一段话是说拉曼光会对待测物荧光吸收有干扰，通过扫空白溶液找到合适的激发光波长。不太懂什么意思。 http:// ![\"荧光分光光度计使用的一些问题\"](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/bcs/2015/1123/bw134h2970304_1448247689_783.jpg#opennewwindow\") http:// ![\"荧光分光光度计使用的一些问题-1\"](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/bcs/2015/1123/bw134h2970304_1448247690_615.jpg#opennewwindow\") 2.我扫的是发射图谱（激发波长固定），之前隔壁老师告诉我待测物的紫外最大吸收波长（待测物紫外最大吸收波长在233~235nm）不一定与它最合适的发射波长相符，有些物质没有紫外吸收但是有荧光吸收，按理说硫化镉是有光致发光特性的，应该扫得出来峰啊...... 师哥告诉我设定的时候“发射终止波长”不要超过“激发波长”的2倍，还有“激发波长”应比“发射起始波长小”10~20nm，后一个无非是不想看到激发波长那个尖锐的峰我觉得这个无所谓，前一个我不知道这么设置有什么必要。 http:// ![\"荧光分光光度计使用的一些问题-2\"](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/bcs/2015/1123/bw134h2970304_1448247689_177.jpg#opennewwindow\") 3.这是激发波长为250nm时候得到的图谱，由于发射终止波长设定在480nm，所以只看到一个上升趋势，我觉得它应该是个峰吧。 http:// ![\"荧光分光光度计使用的一些问题-3\"](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/bcs/2015/1123/w133h2970304_1448247688_419.png#opennewwindow\") 我也闹不清楚到底怎么才能正确的扫出来荧光吸收峰......求万能的虫友指点一二。 |
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【答案】应助回帖
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那我觉得你还是好好看看仪器的说明书，看看激发 发射的设定要求。可以先设定个低波长的激发，然后扫发射光谱。然后激发波长递增，再继续扫发射光谱。之后大概能得到一个最佳发射波长，在这个发射波长下，再反过来验证激发波长。 发自小木虫IOS客户端 |
音轨7楼2015-11-23 22:13:42
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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不知道你用的什么仪器，要确定最佳激发和发射光谱，可以扫3D荧光光谱，有的仪器要求发射波长比激发波长大20nm，我用过瓦里安的荧光，它在设置3D荧光扫描时，没有激发和发射波长的设定限制，二者可以相等。得到3D光谱后，就可清晰看到最佳ex和em了。 发自小木虫IOS客户端 |
3楼2015-11-23 12:21:30
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