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豆哥

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[交流] 【求助】关于肿瘤实验的问题

请教高手

H22肿瘤细胞的体内传代具体的操作是怎么样的?

传代后接种剩余的细胞怎么保存?

如果做抑瘤率实验,选用的小鼠要不是雌雄各半?还是有别的规定?

谢谢指教
!!
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边学边问,才有学问。
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guan1901

铁虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★
karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教!
豆哥(金币+3,VIP+0):多谢
用瘤株注入腹腔即可,但最好在相对无菌的超净台中操作。
接种后剩余的细胞可以放在液氮中冻存,接种密度大约为1.6X10 6个幂/ml  用冻存液放在1ml的冻存管中。
做抑瘤率试验小鼠的体重有要求,要不小鼠容易死掉。
2楼2008-09-17 13:00:09
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蜗牛VS蜗牛

捐助贵宾 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
clkk216(金币+1,VIP+0):多谢指导! 5-9 20:22
豆哥(金币+27,VIP+0):谢谢,全给你了 5-9 22:47
腋下注射最好
冻存看参考书具体操作
对长出肿瘤体积、小鼠体重进行筛选,分组。只选雄鼠就可以,裸鼠。
3楼2009-05-09 11:09:44
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mr_songhua


clkk216(金币+1,VIP+0):多谢指导!谢谢参与虫友讨论~~ 5-9 20:50
引用回帖:
Originally posted by guan1901 at 2008-9-17 13:00:
用瘤株注入腹腔即可,但最好在相对无菌的超净台中操作。
接种后剩余的细胞可以放在液氮中冻存,接种密度大约为1.6X10 6个幂/ml  用冻存液放在1ml的冻存管中。
做抑瘤率试验小鼠的体重有要求,要不小鼠容易死掉。

说的很全面了,我觉得瘤株注入腹腔不一定在相对无菌的超净台中操作,活的老鼠拿到细胞房会被管理员扔出去,肿瘤细胞在超净台制备好放在无菌管子里,拿到动物房给小鼠注射就行了,每只小于0.2ml。
剩余细胞可用正常细胞培养液加10%DMSO就行,就是一般细胞冻存液。
抑瘤率好像要6周以上小鼠吧。
4楼2009-05-09 20:34:45
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蜗牛VS蜗牛

捐助贵宾 (著名写手)

我记得我的金币只有十几个,突然加了这么多,我还以为我记忆力不好呢。
豆哥你咋这么大方呢。
5楼2009-05-10 00:24:44
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蜗牛VS蜗牛

捐助贵宾 (著名写手)

看到了别人和我说的不一样,我又具体了解了下,我觉得我说的还是没错的,虽然细节我不太清楚。
6楼2009-05-12 16:01:32
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洛云


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1、先将细胞离心,根据需要加入一定量生理盐水调整细胞至所需浓度,然后注射在小鼠 腹腔( 或腋窝皮下),每只0.2mL。接种腹腔的至7-9天时(时间过长可能会有血性腹水)可以抽取腹水(乳白色)进行第二次体内传代。
2、剩下的细胞加入冻存液,冻存管上需注明细胞种类及日期等,也可将管至布袋中,袋口拴棉线以便日后从液氮中取出,常规冻存于液氮中。
冻存液配方如下:
1640培养液:小牛血清:二甲基亚砜为7:2:1,并且加入DMSO时要缓慢滴入。
冻存步骤为:4°C 40min,-20°C 30min,-70至-80°C 2至3h,最后至液氮中。
3、做抑瘤实验的小鼠通常选6-8周龄,20g上下2g,如无特别说明需雌雄各半
7楼2009-08-13 11:35:56
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