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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 【求助】关于肿瘤实验的问题
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豆哥

主管区长 (职业作家)

制粒能手

优秀版主优秀版主

[交流] 【求助】关于肿瘤实验的问题

请教高手

H22肿瘤细胞的体内传代具体的操作是怎么样的？

传代后接种剩余的细胞怎么保存？

如果做抑瘤率实验，选用的小鼠要不是雌雄各半？还是有别的规定？

谢谢指教
！！
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边学边问，才有学问。
1楼 2008-09-16 21:07:03
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洛云

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1、先将细胞离心，根据需要加入一定量生理盐水调整细胞至所需浓度，然后注射在小鼠 腹腔（ 或腋窝皮下），每只0.2mL。接种腹腔的至7-9天时（时间过长可能会有血性腹水）可以抽取腹水（乳白色）进行第二次体内传代。
2、剩下的细胞加入冻存液，冻存管上需注明细胞种类及日期等，也可将管至布袋中，袋口拴棉线以便日后从液氮中取出，常规冻存于液氮中。
冻存液配方如下：
1640培养液：小牛血清：二甲基亚砜为7：2：1，并且加入DMSO时要缓慢滴入。
冻存步骤为：4°C 40min，-20°C 30min，-70至-80°C 2至3h，最后至液氮中。
3、做抑瘤实验的小鼠通常选6-8周龄，20g上下2g，如无特别说明需雌雄各半
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7楼2009-08-13 11:35:56
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guan1901

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教！
豆哥(金币+3,VIP+0):多谢
用瘤株注入腹腔即可，但最好在相对无菌的超净台中操作。
接种后剩余的细胞可以放在液氮中冻存，接种密度大约为1.6X10 6个幂/ml  用冻存液放在1ml的冻存管中。
做抑瘤率试验小鼠的体重有要求，要不小鼠容易死掉。
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2楼2008-09-17 13:00:09
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蜗牛VS蜗牛

捐助贵宾 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
clkk216(金币+1,VIP+0):多谢指导！ 5-9 20:22
豆哥(金币+27,VIP+0):谢谢，全给你了 5-9 22:47
腋下注射最好
冻存看参考书具体操作
对长出肿瘤体积、小鼠体重进行筛选，分组。只选雄鼠就可以，裸鼠。
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3楼2009-05-09 11:09:44
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mr_songhua

★
clkk216(金币+1,VIP+0):多谢指导！谢谢参与虫友讨论~~ 5-9 20:50
引用回帖:
Originally posted by guan1901 at 2008-9-17 13:00:
用瘤株注入腹腔即可，但最好在相对无菌的超净台中操作。
接种后剩余的细胞可以放在液氮中冻存，接种密度大约为1.6X10 6个幂/ml  用冻存液放在1ml的冻存管中。
做抑瘤率试验小鼠的体重有要求，要不小鼠容易死掉。

说的很全面了，我觉得瘤株注入腹腔不一定在相对无菌的超净台中操作，活的老鼠拿到细胞房会被管理员扔出去，肿瘤细胞在超净台制备好放在无菌管子里，拿到动物房给小鼠注射就行了，每只小于0.2ml。
剩余细胞可用正常细胞培养液加10%DMSO就行，就是一般细胞冻存液。
抑瘤率好像要6周以上小鼠吧。
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4楼2009-05-09 20:34:45
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