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vivi3168

新虫 (小有名气)

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[求助] 指状青霉菌丝扫描电镜样品前处理已有2人参与

实验需要用扫描电镜观察抑菌剂处理过的指状青霉菌丝表面形态的变化，我用的是PDA固体培养基培养的菌种，文献上说是从菌落边缘取一菌饼，放入2.5%的戊二醛中固定，然后PBS漂洗、梯度乙醇脱水、再干燥，我不明白这个菌饼的取法，是连带着培养基也取出吗？PBS漂洗是离心还是只是冲洗几遍？我想烘干或自然晾干，如果带着培养基的话，培养基会有残留吧？电镜小白求指导啊。。。。。。。

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1楼2015-11-19 09:05:33

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vivi3168

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引用回帖:

2楼: Originally posted by lark001 at 2015-11-19 09:44:04
根据楼主的问题，下面几点可作参考：
（1）“PDA固体培养基培养的菌种，文献上说是从菌落边缘取一菌饼”，个人认为是用接种环在菌落上刮取菌体，轻轻地、尽量不刮到培养基；液体培养基的话，高速离心，弃去培养基即 ...

谢谢亲回复~我也想过用液体培养基，不过菌丝会相互缠绕成小球，不知道这个会不会影响电镜观察？培养初期形成片状，可否取这个时期的菌丝？还有一个问题，是否可以省略乙醇脱水这步然后向你说的那样直接风干？看也有文献是这样做的。。。帮忙指点一下吧

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3楼2015-11-19 13:11:06

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vivi3168

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引用回帖:

4楼: Originally posted by 草溪河 at 2015-11-19 22:55:35
首先取样时在菌落边缘连同培养基切成1-2 X 5 mm大小的样块，最好保持菌块原样，否则会影响菌丝形态。样品处理过程不会用到离心机，漂洗就是用PBS浸泡，将样品中的溶液置换成PBS，包括之后的梯度脱水和乙酸异戊酯置换 ...

最后一步临界点干燥，因为没有相应的干燥仪器，是否可以晾干或风干？

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5楼2015-11-22 09:44:33

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