应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR后i电泳没目的条带， 求助啊
52/1返回列表
查看: 1972  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

z631535213

木虫 (正式写手)

[求助] PCR后i电泳没目的条带， 求助啊 已有5人参与

买的市面上某根的KIT，取的体系是25ul：12.5ul PCR MIX ，5ul 模版，1ul 前引 （10uM） ，1ul后引（10uM），加dd水至25ul
设置的是 94° 3min，  （94° 30s，55° 30s，72° 30s）20cycles ，72° 5min。
跑胶是3%的琼脂糖 60ml，5ul Mark。先是80V 20min，然后120V至结束

想请问下：
1.上面的设置有没有哪些不合理的啊？
2.跑到Mark之前的是不是引物啊？Mark最下面那个是50bp的，Mark加了5ul/琼脂糖60ml，是不是少加点好？
3.是不是进行一下梯度PCR来确定下退火温度啊？

PCR后i电泳没目的条带，  求助啊
2.jpg


PCR后i电泳没目的条带，  求助啊-1
IMG_0604.JPG
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-11-19 08:16:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xy531483760

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

一：退火温度太低
二：模版有可能不纯或者压根没有（建议用没有PCR的做个对照）
三：引物某根的我用的0。5的模版两个都是
四：胶浓度太高了？你做的什么
赞一下 回复此楼
比较笨的小虫虫
11楼2015-11-22 20:54:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
z631535213: 金币+3, ★有帮助 2015-11-19 10:08:04
引物可以再少加点。模板不知道你用的什么，浓度多少？marker上的有点多了
赞一下 回复此楼
2楼2015-11-19 08:50:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z631535213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by a86052 at 2015-11-19 10:18:54
可以，我们之前一直用0.25uM，足够了。根据你的引物退火温度，可以拉个温度梯度试下，循环数也可以多些，例如30。还有，你的片段很小吗，用3%的胶...

设计的时候理论产物是100+bp，200+bp和300+bp。设计的多重引物，所以设计过程中有些引物原则不是执行的十分严谨，因而不大确定引物行不行，就针对每队引物单独跑了20cyc看有没有产物
赞一下 回复此楼
5楼2015-11-19 10:45:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

瑷洱yd

金虫 (小有名气)
感觉没有特异条带，可以试试降低退货火温度，或者提高一下循环次数（我一般都是30循环）。感觉楼主的Mark好了亮哦，可少点一些不吧。
想问楼主为啥跑电源的时候还要改变电压啊？（我也刚开始做实验，我都说一个电压跑结束的）

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2015-11-19 11:19:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +6 一鸭鸭哟 2026-03-14 7/350 2026-03-15 22:12 by Winj1e
[基金申请] 国自科面上基金字体 +4 iwuli 2026-03-12 5/250 2026-03-15 17:07 by 风云无泪
[考研] 材料工程327求调剂 +3 xiaohe12w 2026-03-11 3/150 2026-03-14 20:20 by ms629
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 0703化学求调剂 +5 很老实人 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:57 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 清风问长安 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:15 by JourneyLucky
[考研] 265求调剂 +9 小木虫085600 2026-03-09 12/600 2026-03-14 01:11 by JourneyLucky
[考研] 一志愿安徽大学材料工程专硕313分，求调剂的学校 +8 Yu先生 2026-03-10 10/500 2026-03-14 01:04 by JourneyLucky
[考研] 312求调剂 +6 陌宸希 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:40 by JourneyLucky
[考研] 26考研调剂 +3 ying123. 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:18 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +8 zchqwer 2026-03-10 8/400 2026-03-14 00:01 by JourneyLucky
[考研] 341求调剂 +4 番茄头--- 2026-03-10 4/200 2026-03-13 23:12 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] （081700）化学工程与技术-298分求调剂 +12 11啦啦啦 2026-03-11 35/1750 2026-03-13 21:25 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-12 5/250 2026-03-13 18:31 by ms629
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 0856化工原理 +6 z2839474511 2026-03-10 6/300 2026-03-13 10:41 by houyaoxu
[考研] 337求调剂 +3 睡醒，。 2026-03-09 3/150 2026-03-09 10:02 by 求调剂zz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭