24小时热门版块排行榜    

查看: 1224  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

15853830932

木虫 (小有名气)

[交流] 酶切切不开 已有3人参与

各位大神,我用加酶切位点(HindIII和SspI)的引物PCR出来单一片段,然后做TA连接,但是提质粒做验证的时候,SspI能切开,HindIII酶切不开。试了两次了,还是不行,也过夜切了,不行。求助啊怎么回事。。。

发自小木虫Android客户端
回复此楼
If you shed tear when you miss the sun, you also miss the stars.
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cry_2013

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1、检查一下引物上的酶切位点的碱基对不对(我有师妹引物加酶切位点时就加错了碱基,一直做不出,改了以后就顺利多了)
2、看看公用Buffer对不对,酶切效率怎么样(我感觉Buffer选对了,酶切位点也没问题都能切开,要不就是你的酶失活了)
5楼2015-11-20 16:21:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

shx0743

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
两个酶的盐离子浓度要求一致么?

发自小木虫Android客户端
2楼2015-11-18 09:13:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

15853830932

木虫 (小有名气)

嗯,我用的Thermo的fastdigest酶,两个酶的buf都是一样的。刚看了一下测序图,感觉好像是PCR出问题了。没有P出酶切位点。。。。不知道怎么回事

发自小木虫Android客户端
If you shed tear when you miss the sun, you also miss the stars.
3楼2015-11-18 14:02:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

疯子J-F

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你检查一下引物有没有加强酶切位点,然后重新PCR

发自小木虫Android客户端
4楼2015-11-18 14:47:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 成果系统访问量大,请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦,已经两天这样了 +3 NSFC2026我来了 2026-02-28 3/150 2026-03-01 21:41 by autumntian
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 0805总分292,求调剂 +7 幻想之殇 2026-03-01 7/350 2026-03-01 21:22 by 公瑾逍遥
[考研] 0856材料与化工,270求调剂 +3 YXCT 2026-03-01 3/150 2026-03-01 19:51 by 无懈可击111
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 材料学硕318求调剂 +9 February_Feb 2026-03-01 11/550 2026-03-01 19:47 by 无懈可击111
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +5 礼堂丁真258 2026-02-28 7/350 2026-03-01 19:12 by Js512888
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 0857调剂 +3 一ll半 2026-02-28 3/150 2026-03-01 18:32 by 热情沙漠
[考研] 材料学调剂 +9 提神豆沙包 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:15 by ms629
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 0856调剂 +4 刘梦微 2026-02-28 4/200 2026-03-01 15:35 by 吸一口猫气
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业,申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
信息提示
请填处理意见