24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1252  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

15853830932

木虫 (小有名气)

[交流] 酶切切不开 已有3人参与

各位大神,我用加酶切位点(HindIII和SspI)的引物PCR出来单一片段,然后做TA连接,但是提质粒做验证的时候,SspI能切开,HindIII酶切不开。试了两次了,还是不行,也过夜切了,不行。求助啊怎么回事。。。

发自小木虫Android客户端
回复此楼
If you shed tear when you miss the sun, you also miss the stars.
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cry_2013

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1、检查一下引物上的酶切位点的碱基对不对(我有师妹引物加酶切位点时就加错了碱基,一直做不出,改了以后就顺利多了)
2、看看公用Buffer对不对,酶切效率怎么样(我感觉Buffer选对了,酶切位点也没问题都能切开,要不就是你的酶失活了)
5楼2015-11-20 16:21:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

shx0743

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
两个酶的盐离子浓度要求一致么?

发自小木虫Android客户端
2楼2015-11-18 09:13:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

15853830932

木虫 (小有名气)

嗯,我用的Thermo的fastdigest酶,两个酶的buf都是一样的。刚看了一下测序图,感觉好像是PCR出问题了。没有P出酶切位点。。。。不知道怎么回事

发自小木虫Android客户端
If you shed tear when you miss the sun, you also miss the stars.
3楼2015-11-18 14:02:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

疯子J-F

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你检查一下引物有没有加强酶切位点,然后重新PCR

发自小木虫Android客户端
4楼2015-11-18 14:47:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 348求调剂 +3 小懒虫不懒了 2026-03-27 4/200 2026-03-27 11:34 by 小懒虫不懒了
[考研] 求调剂 +3 刘柯@ 2026-03-24 4/200 2026-03-27 11:28 by shangxh
[考研] 324求调剂 +8 hanamiko 2026-03-26 10/500 2026-03-27 08:06 by hypershenger
[考研] 333求调剂 +7 87639 2026-03-21 12/600 2026-03-26 22:08 by 不吃魚的貓
[考研] 294分080500材料科学与工程求调剂 +4 柳溪边 2026-03-26 4/200 2026-03-26 21:14 by XPU李庆
[考研] 305求调剂 +4 哇卢卡库 2026-03-26 4/200 2026-03-26 20:58 by sanrepian
[考研] 325求调剂 +3 Aoyijiang 2026-03-23 3/150 2026-03-26 20:46 by 不吃魚的貓
[考研] 总分322求生物学/生化与分子/生物信息学相关调剂 +5 星沉uu 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:02 by macy2011
[考研] 340求调剂 +3 Amber00 2026-03-26 3/150 2026-03-26 18:57 by 不吃魚的貓
[考研] 279求调剂 +6 红衣隐官 2026-03-21 6/300 2026-03-26 18:32 by 不吃魚的貓
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +9 holy J 2026-03-21 9/450 2026-03-26 15:47 by 161765490
[考研] 081700 调剂 267分 +11 迷人的哈哈 2026-03-23 11/550 2026-03-26 15:41 by zzll406
[考研] 一志愿哈工大,085400,320,求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:03 by Ainin_
[考研] 289材料与化工(085600)B区求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-22 5/250 2026-03-25 08:20 by mx.yue
[考研] 材料考研调剂生 +3 黄粱一梦千年 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:00 by barlinike
[考研] 277分求调剂,跨调材料 +3 考研调剂lxh 2026-03-24 3/150 2026-03-24 13:52 by JourneyLucky
[考研] 生物学一志愿985,分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
信息提示
请填处理意见