24小时热门版块排行榜    

查看: 1227  |  回复: 4

15853830932

木虫 (小有名气)

[交流] 酶切切不开 已有3人参与

各位大神,我用加酶切位点(HindIII和SspI)的引物PCR出来单一片段,然后做TA连接,但是提质粒做验证的时候,SspI能切开,HindIII酶切不开。试了两次了,还是不行,也过夜切了,不行。求助啊怎么回事。。。

发自小木虫Android客户端
回复此楼
If you shed tear when you miss the sun, you also miss the stars.
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shx0743

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
两个酶的盐离子浓度要求一致么?

发自小木虫Android客户端
2楼2015-11-18 09:13:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

15853830932

木虫 (小有名气)

嗯,我用的Thermo的fastdigest酶,两个酶的buf都是一样的。刚看了一下测序图,感觉好像是PCR出问题了。没有P出酶切位点。。。。不知道怎么回事

发自小木虫Android客户端
If you shed tear when you miss the sun, you also miss the stars.
3楼2015-11-18 14:02:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

疯子J-F

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你检查一下引物有没有加强酶切位点,然后重新PCR

发自小木虫Android客户端
4楼2015-11-18 14:47:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cry_2013

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1、检查一下引物上的酶切位点的碱基对不对(我有师妹引物加酶切位点时就加错了碱基,一直做不出,改了以后就顺利多了)
2、看看公用Buffer对不对,酶切效率怎么样(我感觉Buffer选对了,酶切位点也没问题都能切开,要不就是你的酶失活了)
5楼2015-11-20 16:21:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 15853830932 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料化工调剂 +12 今夏不夏 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:32 by L135790
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:31 by L135790
[考研] 292求调剂 +6 yhk_819 2026-02-28 6/300 2026-03-01 23:23 by 向上的胖东
[考研] 0854复试调剂 276 +3 wmm9 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:13 by 热情沙漠
[考研] 275求调剂 +3 明远求学 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:29 by 刘兵
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 材料类求调剂 +10 wana_kiko 2026-02-28 12/600 2026-03-01 22:10 by 海嵙Y
[考研] 26考研报考西工大材料308分求调剂 +3 weizhong123 2026-03-01 3/150 2026-03-01 21:42 by 公瑾逍遥
[考研] 0856求调剂285 +10 吕仔龙 2026-02-28 10/500 2026-03-01 21:37 by 公瑾逍遥
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 0857调剂 +3 一ll半 2026-02-28 3/150 2026-03-01 18:32 by 热情沙漠
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧? +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
请填处理意见