24小时热门版块排行榜    

查看: 1515  |  回复: 4

15853830932

木虫 (小有名气)

[交流] 酶切切不开 已有3人参与

各位大神,我用加酶切位点(HindIII和SspI)的引物PCR出来单一片段,然后做TA连接,但是提质粒做验证的时候,SspI能切开,HindIII酶切不开。试了两次了,还是不行,也过夜切了,不行。求助啊怎么回事。。。

发自小木虫Android客户端
回复此楼
If you shed tear when you miss the sun, you also miss the stars.
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shx0743

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
两个酶的盐离子浓度要求一致么?

发自小木虫Android客户端
2楼2015-11-18 09:13:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

15853830932

木虫 (小有名气)

嗯,我用的Thermo的fastdigest酶,两个酶的buf都是一样的。刚看了一下测序图,感觉好像是PCR出问题了。没有P出酶切位点。。。。不知道怎么回事

发自小木虫Android客户端
If you shed tear when you miss the sun, you also miss the stars.
3楼2015-11-18 14:02:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

疯子J-F

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你检查一下引物有没有加强酶切位点,然后重新PCR

发自小木虫Android客户端
4楼2015-11-18 14:47:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cry_2013

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1、检查一下引物上的酶切位点的碱基对不对(我有师妹引物加酶切位点时就加错了碱基,一直做不出,改了以后就顺利多了)
2、看看公用Buffer对不对,酶切效率怎么样(我感觉Buffer选对了,酶切位点也没问题都能切开,要不就是你的酶失活了)
5楼2015-11-20 16:21:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 15853830932 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 11:51 by xiangy672
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +6 雨打竹帘 2026-08-30 10/500 2026-08-31 09:29 by huixian257
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
请填处理意见